LUCIFERASE报告基因检测服务的检测原理

背景^[1][2]

自然界中广泛分布着生物发光有机体，其中包括细菌、真菌、鱼、昆虫等。在这些生物发光有机体中催化生物发光反应的各种酶都称之为荧光素酶(Luciferases)，底物则命名为荧光素(Luciferin)。自1986― 1987 年首次被当作报告基因使用以来，荧光素酶基因已成为目前运用最广泛的报告基因之一。尽管来自不同物种的荧光素酶及底物存在有很大的差异，但有一个共同点，即在生物发光反应体系中均需发生氧化反应。它通过两个步骤使底物荧光素发生氧化作用，而产生发光反应，此反应是ATP 依赖性的。杂环荧光素首先腺苷化，然后通过氧化脱羧作用，产生AMP、CO2，并通过激活的荧光素中间产物发射光。因而LUCIFERASE报告基因检测服务也是一种应用广泛的基因服务。

检测原理

LUCIFERASE报告基因检测服务，采用荧光素酶报告基因检测系统，以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)活性。该系统的检测原理是，荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)，然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光，荧光闪烁总数与样品中存在荧光素酶的活性成正比。

实验成果

应用领域 

1.荧光素酶基因标记基因

2.荧光素酶基因标记细胞

3.荧光素酶基因标记微生物

4.活体生物体内成像

5.药物筛选

6.双报告基因系统

主要参考文献

[1] NASEER S，KHAN S，林佳．等.C_3启动子克隆及荧光素酶报告基闲载体构建[J]．高师理科学刊，2016(11)：41-44．

[2] 黄滔，曹玉祥，张志坚，周兴路，魏慧君，吴志浩. 人源DNMTl基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测。皖南医学院学报(J of Wannan Medical College)2018;37(1)