C-ROS癌基因1(ROS1)重组蛋白宿主体系选择

概述^[1]

物种：人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、羊、马、牛、猪、鸡、狗等等

来源： 原核表达

宿主：E.coli

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)

预测分子量：34.7kDa

片段与标签：Leu1937~Phe2210 with N-terminal His Tag

缓冲液成份：磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性状：冻干粉

纯度> 95%

应用

Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

储存：避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月。

稳定性：热稳定性以损失率显示。损失率是由加速降解试验决定，具体方法如下：在37°C孵育48小时，没有显著的降解或者沉淀产生。保质期内，在适当的条件下存储，损失率低于5%。    

C-Ros癌基因1(ROS1)重组蛋白表达服务 - 原核表达[1]

大肠杆菌（E.coli）重组蛋白表达技术经过多年的发展，已经变得非常成熟。但要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达，一个优秀的表达策略必不可少。为了表达重组蛋白的高效表达以及有活性蛋白的表达，通常以下几个方面会涉及：

C-Ros癌基因1(ROS1)重组蛋白宿主体系选择[1]

首先要强调的是要求不同，选择的表达宿主体系也不尽相同：细菌、酵母、丝状真菌和单细胞藻类。每一种表达宿主都有各自的优缺点。例如，如果需要表达的蛋白具有真核的翻译后修饰（糖基化修饰），那么大肠杆菌等原核表达体系并不适用。大肠杆菌表达体系的优点是：

（1）菌体繁殖速度快：20分钟倍增一次，这意味着按照1/100的比例接种（MOI），只需要几个小时培养基细菌即可到达稳定期；

（2）容易实现高密度培养：理论培养密度是1 × 1013 cells/ml，实际培养过程中使用LB培养基在37℃培养大肠杆菌，<1 × 1010 cells/ml。在低温（11℃）诱导蛋白表达时，细菌个数几乎不增长。

（3）转染外源DNA容易，质粒转染效率高。

C-Ros癌基因1(ROS1)重组蛋白表达质粒体系选择[1]

目前最为常用的重组蛋白表达质粒载体融合了复制子(Replicon)、启动子(promoter)、筛选标签(selection marker)、多克隆位点（MCS）和融合蛋白移除策略(fusion tag removal strategy)，如图所示：

主要参考文献

[1] 吴亚州 李佳 张蕾。pcDNA3.1-CD74-ROS1重组质粒构建与表达对肺癌细胞增殖及迁移的影响。2018年4期