基因调取的方法及应用
发布日期:2019/12/31 11:42:56
概述
基因调取是以组织cDNA文库或者细胞cDNA文库为模板，根据目的基因信息，特异性地设计基因引物扩增cDNA。亦可将基因片段或者是功能元件亚克隆至不同的工具载体，以满足不同的科研需求。
基因调取常用方法[1]
RACE法调取基因
步骤
简并引物
总RNA的提取和检测
RT—PCR扩增出cDNA片段
cDNA3’、5’RACE法全长扩增
引物设计、OuterPCR反应、InnerPCR反应、产物回收及测序。
应用[1]
真菌产人参皂苷葡萄糖苷酶基因的调取，根据人参皂件精卧酶的N端氩基酸序列蹬计简井引物．以R1、-PCR得到eDNA片段，采甩3’与5’端的特异性引物，“以菌种总RNA为模板进行扩增．得到cDNA3’及5’末端的基因序列．进而得到目的基因的CDS区全序列。将得到的序列翻译成氨基酸．经计算可知由其编码的蛋白质分子质量约为70.4ku，与前期实验纯化出的人参皂苷精苷酶的分子质醋71ku基本一致，“r以认定所得目的基因的CDS医全序列是正确的。
主要参考资料
[1] 杜枫，金凤燮，鱼红闪。真菌产人参皂苷葡萄糖苷酶基因的调取。大连工业大学学报，第30卷第2期。
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