琼脂糖蛋白A的制备

背景及概述^[1]

琼脂糖蛋白A为一种凝胶，主要用于科学研究。

制备^[1]

有实验以琼脂糖蛋白A凝胶为配基定向偶联单抗，成功制备了AFB1免疫亲和柱。单抗偶联率达98.1%，取48μL纯化抗体偶联，平均相对柱容量在105ng/0.125mL凝胶。柱空白测试表明琼脂糖蛋白A空白凝胶对AFB1无非特异性吸附。不同样品不同质量浓度添加回收实验表明，较小的柱体积能满足样品中AFB1的净化。偶联时单抗纯度要求不高。从偶联后的反应液电泳结果可知，条带为杂蛋白，且有效单抗全部偶联在蛋白A上，揭示该法偶联单抗对其纯度没有过高的要求，由于琼脂糖蛋白A对IgG1有特异性结合，辛酸-饱和硫酸铵初步纯化抗体即可满足偶联要求。

定向偶联过程中单抗有效利用率为52.7%。将纯化好的单抗与溴化氰活化的4FF葡聚糖偶联制备抗ZEN单克隆抗体免疫亲和柱，固载350μgZEN单克隆抗体的容量为0.40μg，则抗体的有效利用率为26.93%。从不同偶联方法制备真菌毒素亲和柱的单抗有效利用率来比较，琼脂糖蛋白A凝胶的定向偶联是溴化氰活化随机偶联的1.96倍。该结果与报道MG31-rproteinA-SepharoseFF的抗原结合容量是MG31-CNBr-Sepharose4B抗原结合容量的1.8倍结论相同，说明定向偶联有助于提高免疫亲和吸附剂的抗原结合容量。定向偶联过程中交联条件的优化及2种偶联方法制备AFB1免疫亲和柱的比较是下一步研究的方向。

主要参考资料

[1] 基于蛋白A-琼脂糖凝胶黄曲霉毒素B1免疫亲和柱的制备