四烯雌酮的含量检测

概述^[1][2]

四烯雌酮，也叫烯丙孕素，是一种口服型活性孕激素，以类似于天然孕酮的作用模式来抑制促性腺激素的释放。其具有19-去甲睾酮和孕酮的双重性质，有独特的药效学和药动学性质。与所有类固醇一样，四烯雌酮通过自身脂溶性可以渗透入靶细胞中然后与特定受体结合来发挥作用，其类似于天然孕酮的作用模式来抑制促性腺激素的释放，可作为家畜同期发情的药物。

含量检测^[3]

CN201610060735.2提供一种四烯雌酮含量的高效液相色谱(HPLC)检测方法，具有简便、高效、灵敏度高、分离效果好、精密度和准确度高的优点。

采用如下的色谱条件进行检测：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物的反相色谱柱，AgilentC18柱；流动相采用乙腈-0.01％磷酸溶液，其中，乙腈的体积分数为60％-80％(即，乙腈的体积占乙腈和0.01％磷酸溶液的总体积的60％-80％)，流速0.8-1.2ml/min；柱温是20-40℃。

其中，色谱柱优选的采用AgilentC18柱(4.6*250mm，5μm)和AgilentC18柱(4.6*150mm，5μm)进行试验，更优选AgilentC18柱(4.6*250mm，5μm)，适合的色谱柱使得被测样品具有更好的分离效果和较短的保留时间。

其中，流动相中用0.01％磷酸溶液代替常用的水与乙腈混合使用，同时控制乙腈的体积含量，能够很好地改善四烯雌酮的注射液在色谱检测时造成的峰形拖尾的问题，并在较短的保留时间内获得较好的出峰效果，有利于检测精度的提高。乙腈的优选体积是70％。

其中，流速与柱温的控制、结合上述流动相的选取，能够使得四烯雌酮的注射液更好的分离并形成良好峰形，有利于提高检测精度。优选流速是1.0ml/min；优选柱温为30℃。

所述方法优选的采用岛津LC-20AT高效液相色谱仪，采用紫外检测器，检测波长为236nm，进样量以20μl为宜。

本发明创造的方法具体地包括下述步骤：

S1：用乙腈配置已知四烯雌酮含量浓度的标准溶液，并采用如上所述的色谱条件进行同一色谱条件下的检测，计算不同浓度的标准溶液在同一保留时间下的峰面积，作出获得峰面积y关于标准溶液浓度x的标准曲线方程y＝f(x)；

S2：将待测样品经必要处理后获得待测四烯雌酮样品溶液，采用同步骤S1的液相色谱检测条件(包括色谱条件、保留时间、进样量等)，获得待测四烯雌酮样品溶液在同一保留时间下的峰面积，并根据步骤S1所获得的标准曲线方程y＝f(x)，计算得到待测四烯雌酮样品溶液的浓度；

S3：根据待测四烯雌酮样品溶液的浓度获得待测样品的四烯雌酮含量数据。

其中，所述步骤S1中，标准曲线方程y＝f(x)的标准溶液浓度x在50-1000μg/ml范围，即本发明能够在较大的检测范围内获得准确可靠的检测结果。进一步，所述标准曲线方程y＝f(x)为一元一次方程，相关系数R2≥0.99，能够获得拟合度很高的线性方程。

其中，所述步骤S2中，对待测样品的必要处理可以包括对待测样品进行一定比例的稀释，和/或对样品进行过滤等操作。

本发明创造通过HPLC、同时辅助使用紫外检测器对四烯雌酮的含量进行测定。经过精密度试验、线性关系试验和加样回收试验等对方法进行了验证，结果表明该方法准确可靠，检测范围大，灵敏度高和准确性高。

应用^[4]

CN201610620809.3提供一种毛驴集中受孕方法。现有毛驴发情分散，排卵摸排工作量大，人工授精成功率低。为此，本发明毛驴集中受孕方法包括下述步骤：一).母驴集中发情(1).第1天选取空怀母驴若干头，每头母驴注射氯前列烯醇2-8mg；(2).第2天起，将四烯雌酮按每头母驴每天8-30mg混入母驴日粮当中连续饲喂7-18天；(3).饲喂四烯雌酮的最后一天，每头母驴注射氯前列烯醇2-8mg，同时停止饲喂四烯雌酮；二).母驴集中人工授精—停止饲喂四烯雌酮的第4-8天，对各个母驴进行人工授精，并注射Hcg1000-6000单位，隔日对母驴再进行一次人工授精。本发明具有操作简便、受孕率高、劳动强度小的优点，适合规模化养驴。

主要参考资料

[1]CN201710146675.0一种四烯雌酮的合成方法

[2][中国发明]CN201610269070.6一种四烯雌酮纳米乳液及其制备方法

[3][中国发明]CN201610060735.2一种四烯雌酮含量的高效液相色谱检测方法

[4]CN201610620809.3毛驴集中受孕方法