依普利酮杂质7的制备方法

背景及概述^[1][2]

依普利酮杂质7即11-羟基坎利酮，是合成依普利酮的起始原料。依普利酮主要用于治疗原发性高血压以及心肌梗塞后的心力衰竭的药物，也是个获准上市的选择性醛固酮受体阻断剂。在体内由CYP4503A4代谢，半衰期为4～6小时。依普利酮可用于提高急性心脏病发作后的充血性心力衰竭患者的生存率。

应用^[1]

依普利酮杂质7即化合物A。

制备^[2]

菌种与培养基

菌株 : 赭曲霉( Aspergillus ochraceus) NG0216。

斜面培养基 : PDA 培养基 。

发酵培养基( g/L) : 葡萄糖 10, 玉米浆 15, 酵母膏 1. 0, pH 5. 8, 121 ℃ 0. 1 MPa 灭菌 15 min 。转化培养基( g/L) : 葡萄糖 5, 玉米浆 15, 酵母膏1. 0, 坎利酮 10, 七水硫酸镁 0. 9, pH 5. 8, 超声处理( 12. 4 W/cm²) 10 min 。

步骤如下：

1. 赭曲霉NG0216的培养

孢子接种于斜面,28℃扩增5～7d,扩增孢子制成孢子悬浮液(108个/mL)后按7%接种量,温度28℃下150r/min培养24h,抽滤得湿菌体,洗涤后备用。

2. 细胞的固定化

聚乙烯醇-硼酸凝胶:8g聚乙烯醇加75mL无菌水,80℃搅拌溶解,冷却至40℃后与菌悬液(15g湿菌体加25mL无菌水)混合均匀,用8#注射针头滴入5%硼酸溶液中,4℃放置1h,制成直径2mm左右的颗粒。卡拉胶凝胶:3g钠型K-卡拉胶加75mL无菌水,40℃搅拌溶化,30℃保温;再与30℃保温的菌悬液(同上)混合均匀,用8#注射针头滴入0.15mol/LK2SO4溶液中,4℃放置1h,制成直径约2mm的颗粒。海藻酸钙凝胶:4%的海藻酸钠溶液75mL与菌悬液(同上)混合均匀,用8#注射针头滴入5%的氯化钙溶液中,静置固化1h,得到直径约2mm的颗粒。

3. 固定化细胞转化方法

分别将“2”中制备的固定化颗粒加入含100mL转化培养基的500mL摇瓶中,26℃,150r/min转化48h,过程中控制葡萄糖浓度在2.5～5.0g/L之间。

4. 转化率的测定

采用文献的HPLC法测定。

5. 坎利酮及产物溶解度的测定

按文献的方法测定坎利酮及产物粗品在乙酸乙酯中的溶解度。

6. 产物纯品的制备

转化结束,单层纱布过滤,滤液抽率得到产物粗品,去离子水清洗两遍后50℃真空干燥,测定转化率。以溶解度为基础,称取一定量粗品于结晶器中,加入100mL乙酸乙酯,搅拌、升温至55℃完全溶解后在KF-49冷井中控温渐冷至15℃,放置2h,抽滤晶浆得纯化结晶,50℃真空干燥后重结晶多次,得产物纯品结晶。

主要参考资料

[1]商艳梅,郑忠辉,赵淑娟.依普利酮的合成[J].药学研究,2015,34(06):365-367.

[2]茅燕勇,毛斌,范伟平.固定化赭曲霉NG0216细胞羟基化坎利酮[J].生物加工过程,2005(02):45-49.