小鼠肺大动脉平滑肌细胞试剂盒的应用

背景^[1-2]

小鼠肺大动脉平滑肌细胞试剂盒适用于分离培养小鼠肺大动脉平滑肌细胞。小鼠肺大动脉平滑肌细胞试剂盒提供了的组织分离条件，分离单个细胞的效率高。此外，小鼠肺大动脉平滑肌细胞试剂盒还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。

生理结构^[3-6]

小鼠肺大动脉平滑肌细胞分离自正常小鼠肺动脉组织，细胞呈梭形或多角形。该细胞所表达的钙通道表面表达的ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁炎症反应。该细胞也是多数重要动脉疾病的靶细胞。虽然肺大动脉组织机械韧性很强，但利用小鼠肺大动脉平滑肌细胞试剂盒中提供的肺大动脉组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的薄的肺大动脉组织片能使得肺大动脉组织中成肺大动脉细胞的一些功能特性发生改变，从而将成肺大动脉细胞分离开来。

平滑肌细胞是指构成平滑肌组织。平滑肌即无纹肌的通称，是被视为较横纹肌原始的一种肌肉。平滑肌除作为无脊椎动物的躯体肌而有广泛分布外，在脊椎动物除心肌之外而大部分内脏肌也是由平滑肌组成的。

应用^[7][8]

用于AS小鼠主动脉平滑肌上TRPC1-BK信号复合体分子表达量的变化研究

冠状动脉粥样硬化性心脏病、缺血性脑血管病等缺血性心脑血管疾病已成为严重威胁人类健康的流行性非传染病,而动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）斑块的发生和发展是其重要的病理生理基础。AS发生机制复杂,在斑块的形成和发展过程中,血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）的迁徙、增殖、表型转换及细胞外基质的产生起到主要作用。因此,研究VSMCs功能在AS斑块发生和发展中的作用对于防治冠心病具有重要意义。而VSMCs内钙离子(calcium ion,Ca2+)不仅是VSMCs收缩和舒张的主要调节因子,而且作为第二信使对于VSMCs的迁徙、增殖、表型转换及细胞外基质的产生也起到了关键的作用。

瞬时受体电位通道（Transient receptor potential channel,TRPC）是一类非选择性的阳离子通道,为细胞感受器,包括TRPC1、TRPC2、TRPC3、TRPC4、TRPC5、TRPC6、TRPC7这七种类型,而这七种TRPC通道中,最早发现研究最深入的是TRPC1通道,这种通道在VSMCs上广泛分布。与经典电压门控性Ca2+通道不同的是TRPC1通道无电压依赖性。当肌浆网内Ca2+耗竭时,TRPC1通道开放,Ca2+内流增加,血管收缩,故TRPC1通道功能主要是参与VSMCs收缩和增生、细胞凋亡及信号转导等。TRPC1通过调控Ca2+内流影响机体的生理机能。

研究表明,多种病理生理状态与TRPC通道表达量增多和减少、通道开闭活性异常存在相关性。使用抑制剂来抑制TRPC通达蛋白的表达或使用特异性TRPC通道的阻滞剂可使细胞内Ca2+浓度降低、血管舒张,目前认为,TRPC家族成员是构成细胞膜上钙池操纵性Ca2+通道和受体操纵性Ca2+通道的分子基础,它作为主要的Ca2+内流通道,不仅参与机体许多生理功能,还与多种病理过程相关。

采用动脉粥样硬化组和对照组小鼠分别10只,处死后分离得到主动脉血管平滑肌组织,从组织中提取总RNA及总蛋白,使用反转录-聚合酶链式反应（reverse-transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）、免疫蛋白印记（Western blot）及免疫组化等方法检测并比较两组小鼠主动脉血管平滑肌组织中TRPC1、大电导钙离子激活钾通道α亚单位(large conductance Ca2+-activated K+channelαsubunit,BKα)及大电导Ca2+激活钾通道β1亚单位(large conductance Ca2+-activated K+channelβ1 subunit,BKβ1)亚基m RNA和蛋白表达量的差异。

参考文献

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[2]Chronic intermittent hypobaric hypoxia antagonizes renal vascular hypertension by enhancement of vasorelaxation via activating BKCa[J].Yue Guan,Na Li,Yan-Ming Tian,Li Zhang,Hui-Jie Ma,Leonid N.Maslov,Sheng Wang,Yi Zhang.Life Sciences.2016

[3]Direct effect of chronic hypoxia in suppressing large conductance Ca2+‐activated K+channel activity in ovine uterine arteries via increasing oxidative stress[J].Xiang‐Qun Hu,Xiaohui Huang,Daliao Xiao,Lubo Zhang.J Physiol.2016(2)

[4]BK channelβ1-subunit deficiency exacerbates vascular fibrosis and remodelling but does not promote hypertension in high-fat fed obesity in mice[J].Hui Xu,Hannah Garver,Roxanne Fernandes,Jeremiah T.Phelps,Jack J.Harkema,James J.Galligan,Gregory D.Fink.Journal of Hypertension.2015(8)

[5]APOA5 variants predispose hyperlipidemic patients to atherogenic dyslipidemia and subclinical atherosclerosis[J].Montse Guardiola,Montserrat Cofán,Isabel de Castro-Oros,Ana Cenarro,Núria Plana,Philippa J.Talmud,Lluís Masana,Emilio Ros,Fernando Civeira,Josep Ribalta.Atherosclerosis.2015(1)

[6]Inositol 1,4,5 trisphosphate receptor 1 is a key player of human myoblast differentiation[J].Fabrice Antigny,Stéphane Konig,Laurent Bernheim,Maud Frieden.Cell Calcium.2014(6)

[7]Simultaneous measurement of cytosolic and mitochondrial calcium levels:Observations in TRPC1-silenced hepatocellular carcinoma cells[J].Cigdem Selli,Yasemin Erac,Metiner Tosun.Journal of Pharmacological and Toxicological Methods.2014

[8]凌冬云.AS小鼠主动脉平滑肌上TRPC1-BK信号复合体分子表达量的变化研究[D].安徽医科大学,2017.