荛花酚的制备方法

背景及概述^[1]

祖师麻为药名。见《陕西中药志》。又名大救驾。为瑞香科植物黄瑞香DaphnegiraldiiNitsche的根皮或茎皮。分布山西、陕西、甘肃、青海、四川等地。辛、苦，温，有小毒。祛风除湿，行瘀止痛。①治风湿痹痛，四肢麻木，跌打损伤，半身不遂，感冒头痛，胃痛及各种神经痛。煎服，3～6g。②痰核流注、疔疽发背、皮肤痒症，制成软膏或硬膏贴患处。制成醑剂外用，可作发泡剂。孕妇忌服。本品含瑞香素和瑞香苷，还含芫花素、β-谷甾醇等。瑞香素对小鼠有镇痛和镇静作用；皂苷部分有抗炎、消肿作用。瑞香素可降低动物血压，增加冠脉流量，对心肌缺血有保护作用。在体外对金黄色葡萄球菌，大肠、绿脓及福氏痢疾杆菌有抑制作用。祖师麻毒素虽也有中枢抑制作用，但应认为是一种毒性成分。利用色谱分析技术，对祖师麻的甲醇提取物进行活性指导下的分离，发现了具有神经保护作用的化合物荛花酚。研究显示，从祖师麻中分离出的荛花酚可以保护培养的神经元，降低H2O2和谷氨酸对其造成的损伤，提高神经元存活率。

制备^[2-3]

1）研究显示，荛花酚可以保护皮层神经元，使受H2O2损伤的皮层神经元的还原型谷光甘肽水平和抗氧化酶的活性不会明显下降。推测荛花酚的抗氧化损伤作用可能部分是由星形胶质细胞介导的。脑缺血、癫痫、创伤、痉挛和一些神经退行性疾病中发生神经元凋亡，都有谷氨酸的神经毒性的作用。谷氨酸神经毒性的急性表现形式是由Na+和K+进入神经元引起细胞肿胀以至死亡。由NMDA/AMPA/海人藻酸等激动剂导致的迟发性神经元退行性病变是Ca2+依赖性的，要求短时暴露在高浓度的Ca2+或长时间暴露在低浓度的Ca2+。还有几种信号通路也参与了谷氨酸诱导的神经元凋亡，例如花生四烯酸以及超氧化物阴离子(O2-·)、羟基(OH·)和H2O2等氧自由基的释放。这为进一步荛花酚抗谷氨酸诱导的神经元损伤作用的机制提供了思路。现在，荛花酚细胞内和分子水平的作用机制还不完全清楚。但是，结果显示该化合物对培养的皮层神经元具有显著地神经保护作用，该作用至少部分是通过抗氧化作用实现的。天然产物可以减轻H2O2或谷氨酸导致的神经毒性，这可能会为治疗氧化损伤导致的神经退行性疾病提供一个有用的治疗方向。

2）荛花酚诱导人鼻咽癌CNE细胞(简称CNE细胞)凋亡的效应。以不同浓度的荛花酚作用于CNE细胞，MTT检测分析荛花酚对细胞增殖的影响，AnnexinV/PI双标后流式细胞仪检测凋亡情况，Westernblot检测凋亡相关蛋白(caspase-3、caspase-9、PARP、细胞色素C、Bax、Bcl-2)的表达。JC-1染色检测线粒体膜电位，DCFH-DA染色检测活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)生成。结果荛花酚以时间和剂量依赖性方式抑制CNE细胞的增殖，荛花酚处理诱导CNE细胞发生明显凋亡，Bax/Bcl-2比值增加，细胞色素C从线粒体释放到胞浆，caspase-3和caspase-9活化，PARP发生剪切。荛花酚还可诱导CNE细胞线粒体膜电位下降，线粒体膜通透转运孔(PTP)开放，ROS含量升高。结论荛花酚可显著诱导CNE细胞的凋亡，机理与影响线粒体功能密切相关。

主要参考资料

[1] 中医大辞典

[2] 荛花酚对H2O2和兴奋性神经递质诱导的大鼠皮层神经元细胞损伤的保护作用

[3] 线粒体参与荛花酚诱导人鼻咽癌CNE细胞凋亡机制