人直肠癌组织源细胞提取物的应用

背景^[1]

人直肠癌组织源细胞提取物是从人原代直肠癌组织源细胞提取的。人直肠癌组织源细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

应用^[2-8]

人直肠癌组织源细胞是直接从生物体获取细胞进行培养。由于细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。利用此方法还可直接服务于临床实践。例如，用从手术中切除的肿瘤细胞进行原代培养，然后用该培养细胞进行抗癌药物的筛选，根据肿瘤细胞对加入的化疗药物的敏感性来帮助选择最有效的化疗方案，有可能起到增强疗效、降低副作用的作用。人直肠癌组织源细胞在学术研究、生物技术和医药领域中具有广泛的应用前景，具体表现在以下几个方面：

一、用于癌症研究，验证由细胞株研究获得的结果；

二、预测个体样本的反应和排斥性，从而选择最有效的抗癌药物；

三、筛选最具选择性或毒性的新药化合物；

四、作为识别靶标进行抗肿瘤药物筛选与模型建立等。

用于人直肠癌组织匀浆上清对树突状细胞的内皮化影响

树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前所知的机体内功能最强的专职性抗原提呈细胞，是机体细胞免疫反应的始动者，在肿瘤免疫应答的诱导中具有独特的地位。而在体内，肿瘤组织通过分泌抑制性细胞因子营造特殊的微环境来影响树突状细胞的功能，从而逃脱机体的免疫监视。

肿瘤浸润树突状细胞前体在VEGF-A的影响下，发生内皮细胞化，参与了肿瘤微血管的形成，从而促进了肿瘤的生长、扩散、转移。研究目的本实验研究直肠癌肿瘤微环境对DC的功能和细胞表型的影响，在体外利用直肠癌匀浆上清液作为人外周血来源的DC培养的诱导分化剂，来观察DC内皮化等表型变化的现象，探讨肿瘤血管发生的新机制，为肿瘤治疗提供一种新的治疗靶点和治疗思路。

方法1．免疫组化检测肿瘤微血管处S-100蛋白的表达免疫组化SABC法对10例直肠癌及癌旁组织切片进行检测，来观察肿瘤组织微血管壁及微血管旁有无S-100蛋白的表达，因S-100蛋白可作为树突状细胞的一种特异性标记分子，可以间接推测肿瘤环境中DCs是否参与了肿瘤微血管的形成。

2．ELISA检测匀浆上清液VEGF-A的含量将肿瘤组织200mg：1ml生理盐水的比例制成肿瘤组织匀浆，用ELISA方法检测癌及癌旁匀浆上清中VEGF-A活性因子含量的差异。

3．直肠癌匀浆上清对树突状细胞表型的影响从外周血来源的单核细胞来培养树突状细胞，在DC发育的早期加入匀浆上清诱导其内皮化。树突状细胞在培养至第7d前，可视为未成熟状态。因此设第3d癌上清加入组，第3d癌旁上清加入组；第7d癌上清加入组，第7d癌旁上清加入组；并设未加上清的正常培养组作对照。

4．流式细胞学检测培养细胞CD1a/CD31,CD1a/CD34双阳性的表达FACS Calibar检测，Cellquest分析软件分析检测结果。

5．免疫细胞化学检测培养细胞vWF的表达对培养细胞进行单细胞悬液涂片，观察内皮性标记分子vWF的表达情况。

结论

1、在直肠癌肿瘤微血管壁及血管旁均发现DC的出现，说明肿瘤组织浸润的未成熟状态的树突状细胞一部分趋化到肿瘤微血管处。

2、癌匀浆上清中活性因子VEGF-A的浓度明显高于癌旁上清。3、癌及癌旁匀浆上清可以促使末成熟状态的DC高表达双阳性CD1a/CD31、CD1a/CD34和Vwf内皮性标记分子，使其趋向内皮化。

参考文献

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