丙烯酰胺-13C3的应用

背景及概述^[1]

 丙烯酰胺-13C3又叫13C3-丙烯酰胺。可用于丙烯酰胺的测定。

应用^[1]

丙烯酰胺(Acrylamide)，化学分子式CH2CHCONH2，是一种易溶水的无色透明片状结 晶，作为一种常见的有机合成原料，在工业上得到了广泛的应用。国际癌症研究中心(IRAC) 将丙烯酰胺列为IIA类致癌物；WHO认为“致癌风险性超过10-5的指导值为0.5ug/L”；自2002 年瑞典科学家首次发现淀粉类食品在高温加工过程中会产生大量的丙烯酰胺后即引起全球广泛关注。

CN201610319641提供了一种绿茶丙烯酰胺测定方法为：

(1)样品前处理：

称取粉碎后的绿茶样品依次加入甲酸、同位素标记丙烯酰胺标准溶液，混匀，在 30-90℃水浴并振荡10-60min；然后依次加入乙腈、硫酸镁、氯化钠，密封振荡，离心；取上清液，水浴下氮气吹干，过滤，得到预处理样品；

所述的同位素标记丙烯酰胺标准溶液为13C3-丙烯酰胺溶解于体积百分比浓度 0.1％甲酸中制得，13C3-丙烯酰胺的浓度为30-70ng/mL。

绿茶粉末、甲酸、同位素标记丙烯酰胺标准溶液的质量体积比为1g∶7-11mL∶0.8- 1.2mL。

绿茶粉末、乙腈、硫酸镁、氯化钠的质量体积比为1g∶9-11mL∶3-5g∶0.5-1.5g。

作为优选，通过5000-12000rpm/min离心4-10min，取上清液，在30-90℃水浴下氮气吹干，经0.45μm微孔滤膜过滤。

(2)净化：采用固相萃取柱对预处理样品进行净化处理，得到待测样品；

所述的净化方法为：对固相萃取柱进行预处理后，将步骤(1)得到的预处理样品进行上样，收集透过液，过膜，得到待测样品。

(3)采用高效液相色谱串联质谱法对待测样品进行检测，通过内标法计算丙烯酰胺含量。分别将试样和系列标准品注入HPLC-MS/MS系统，记录丙烯酰胺和13C3-丙烯酰胺峰面积，以丙烯酰胺和13C3-丙烯酰胺的浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标作图，绘制丙烯酰 胺标准曲线。由此计算样品中丙烯酰胺的含量。作为优选，每个处理进行三次重复，取其平均值进行分析。

色谱测试条件为：流动相包括体积浓度为为99.9％的水、乙腈的混合液与流动相体积浓度为0.1％的甲酸；流速为200μL/min；进样体积10μL；柱温34-36℃，其中水、乙腈的混合液中水与乙腈的体积比为99∶1。

质谱条件：离子化方式为ESI离子源；扫描方式为正电离；检测方式为多离子反应监测，碰撞能量为8eV，碰撞诱导解离电压：50V。

离子源条件：干燥气温度：325C；干燥气流速：5L/min；雾化气压力：45psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min；毛细管电压：3000V，其中：

本发明针对绿茶基质特性，优化样品前处理方法，以13C3-丙烯酰胺为内标，采用多选择反应监测(MRM)模式，通过方法学论证，构建基于HPLC-MS/MS的绿茶丙烯酰胺定量分析 方法，同时根据该分析方法在茶区茶样分析方法上进行了应用，对我国主要产茶区的10个 绿茶样品进行了丙烯酰胺测定。与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的检测方法准确性、重现性、稳定 性较好，适于绿茶中丙烯酰胺的实际检测。

主要参考资料

[1] [中国发明] CN201610319641.2 一种绿茶丙烯酰胺测定方法与应用