克仑特罗的用途与检测方法

发布日期:2019/10/8 16:12:48

背景及概述[1][3]

又叫克伦特罗。又称克喘素，是一种β-肾上腺素激动剂(简称β-兴奋剂)，医学上常用于治疗哮喘。具有促进动物生长、降低脂肪含量、提高瘦肉率的作用，因而常被用于饲料添加剂，俗称瘦肉精。它会在动物组织中形成残留，人食用了含有克伦特罗的猪肉后会引起中毒，通常会出现肌肉震颤、心悸、精神紧张、恶心、头晕等症状。我国政府于1997年明令禁止盐酸克伦特罗作饲料添加剂。
“瘦肉精” 是盐酸克伦特罗的俗称，既不是兽药，也不是饲料添加剂，医学上叫克伦特罗、克喘素等。20世纪90年代初国外曾用于饲料添加剂，猪食用后在代谢过程中促进蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解，提高了猪肉的瘦肉率，因此称为“瘦肉精”。后因人的不良反应而被禁用。由于“瘦肉精”化学结构稳定，在动物机体内不易分解，残留时间长，含“瘦肉精”残留的肉经过126℃油煎5分钟，只能破坏一半的残留。人食用有“瘦肉精”残留的猪肉，特别是猪肝、猪肺，会造成中毒，出现头晕、心悸、呕吐、全身肌肉颤抖等症状，甚至造成畸变和诱发恶性肿瘤，严重影响人体健康。消费者在购买猪肉时，到正规市场，不要买肉质松疏且偏红色，肥膘很薄并带有很多气泡的猪肉。

检测方法[1]

方法一、

首先利用热聚合方法在金膜基底上制备克伦特罗分子印迹聚合物膜，对该聚合物膜进行洗脱得到克伦特罗分子印迹芯片；以该芯片作为表面等离子体共振传感器的传感芯片用于光学传感器对克伦特罗分子实现特异性、高灵敏度识别功能。其具体步骤如下：

1)首先在光学盖玻片上通过真空蒸镀法或溅射法镀上一层20～100nm的金膜，以此作为金膜基底；

2)将功能单体与克伦特罗分子溶解在溶剂中，超声5～10min，预聚合1-5h；

3)向第2)步得到的反应液中加入交联剂和引发剂，超声5～10min后通氮气除氧5～10min；

4)用乙醇淋洗硅烷化载玻片，并用氮气吹干，再用封口膜紧粘在硅烷化载玻片的表面，然后在封口膜的中间区域加工出空白区域，作为成膜区域，得到附有支撑膜的硅烷化载玻片，载玻片上剩余的封口膜作为支撑膜；

5)取第3)步得到的反应液滴加到附有支撑膜的硅烷化载玻片上，使反应液充满成膜区域，盖上金膜基底并夹紧固定使二者中间没有气泡，放入密闭反应器中，在氮气保护下，55～70℃温度下加热反应3.5～24小时；

6)加热结束后将载玻片与金膜基底分开，分子印迹聚合物膜附着在金膜基底上，晾干后用洗脱液进行洗脱金膜基底的分子印迹聚合物膜，得到克伦特罗分子传感印迹芯片；

7)将第6)步制备的克伦特罗分子印迹传感芯片固定在表面等离子体共振检测仪上，将溶剂流过传感芯片，待仪器显示反射光强达到稳定不变时，对反射光强按角度进行扫描，记录下SPR光谱图；

8)将克伦特罗固体加入溶剂定容，制备不同浓度的克伦特罗标准溶液，按照由低浓度到高浓度的顺序，分别流过传感芯片；每次流入克伦特罗标准液时与传感芯片反应1-15min，待仪器显示反射光强达到稳定不变，然后流过溶剂，待仪器显示反射光强再次达到稳定不变时，对反射光强按角度进行扫描，记录下此浓度的克伦特罗标准液与传感芯片发生吸附反应后的SPR光谱图，直到得到各个浓度的克伦特罗标准溶液与传感芯片反应后的SPR光谱图；

9)分别将第8)步得到的不同浓度的克伦特罗标准溶液与传感芯片反应后的SPR光谱图与第7)步得到吸附克伦特罗标准溶液前的SPR光谱图进行比较，计算各浓度下吸附反应前后引起的SPR共振角的位移值Δθ；

10)以SPR共振角的位移值Δθ为纵坐标，以加入的克伦特罗标准溶液浓度值的负对数作为横坐标绘制标准曲线；

11)根据待测样品与洗脱后的克伦特罗分子传感印迹芯片发生吸附反应前后引起SPR共振角的位移值Δθ，在第10)步得到的标准曲线上读出对应的克伦特罗含量。

方法二、

一种检测技术领域的检测动物性食品中盐酸克伦特罗的快速测试方法，首先合成酶标记克伦特罗偶联物，然后在硝酸纤维素膜上固定辣根过氧化物酶与抗克伦特罗的单克隆抗体，经脱脂奶粉封闭及冷冻干燥后将这种包被有抗体及酶的纤维素膜放置在一次性聚氟乙烯或玻璃材料制成的反应孔内，并用聚四氟乙烯膜封装后贮存待用；配制显色底物液，同时装配检测克伦特罗快速反应板，在现场检测时，将预处理过的待检样品和酶标记克伦特罗偶联物混合后滴加于反应板的反应孔内的抗体膜上，室温反应后用水冲洗，再将底物显色液加入反应孔内，观察结果，根据显色程度判定克伦特罗的含量。本发明灵敏度高，操作简便省时，有广阔的应用前景。