糜胰蛋白酶

CAS号:
英文名:trysin-chymotrypsin
中文名:糜胰蛋白酶
CBNumber:CB01166701
分子式:
分子量:0
MOL File:Mol file

化学性质糜蛋白酶系从锗胰中获得的糜蛋白酶和胰蛋白酶的混合晶体，具有两种酶的性质，结晶可溶于生理盐水，水溶液易失活，pH7～8活性最强，干燥时比较稳定，它是猪胰腺分泌的一种肽链内切酶，具有糜蛋白酶和胰蛋白酶协同水解蛋白质肽链的作用。水解酪蛋白的活力与牛α-糜蛋白酶相当，但其中所含糜蛋白酶水解苯甲酰酪氨酸乙酯的活力却相当于牛、羊糜蛋白酶的活力的3倍。猪胰蛋白酶水解酯键的活力也与牛、羊糜蛋白的活力相似。
注射用糜胰蛋白酶是糜胰蛋白酶再结晶滤饼经透析、沉淀过滤，丙酮脱水3次再真空干燥制得的粉针剂。糜胰蛋白酶片为含糜胰蛋白酶的肠溶薄膜片。
用途糜蛋白酶可用来治疗各种炎症如：对于慢性支气管炎、支气管哮喘、胃炎、宫颈炎、盆腔炎、化脓性中耳炎、角膜炎、前列腺炎、栓塞性静肪炎、脑血栓形成等均有一定疗效。对炎性水肿、血肿、术后粘连、溃疡、血栓等也有一定疗效。但是，注射时有局部刺激，可引起过敏反应。口服时勿嚼碎，以免被胃蛋白酶破坏而失效。有严重肝功能障碍和血凝功能不正常者禁用。
肌注，一日1～2次，每次5mg，以2ml苯甲醇注射液或生理盐水溶解后注射，疗程10～10日。用于预防或控制复发，每周注射2～3次，每次5mg，外用：以生理盐水溶解后纱布浸湿外敷，或与抗生素软膏拌匀后涂纱布上外敷，每日换药1～2次。
生产方法提取将新鲜或冷冻锗胰，解冻、洗净并投入绞肉机绞碎，按照猪胰浆量加2倍量体积的硫酸溶液（0.125mol/L），搅拌均匀，搅拌下提取1h，调节PＨ３右左，于4⁰放置过夜。次日，用双层纱布过滤，滤渣用等体积冷硫酸溶液（0.125mol/L），重复提取1次，合并2次滤液，得提取液。
猪胰脏^{H{2SO₄;pH3;4⁰}→_提取提取液
分段盐析在不断搅拌下，将提取液中逐渐加入工业用硫酸铵一定量，使硫酸铵的饱和度达25%。再加少量活性白陶土一定量助滤，放置低温处，1d后过滤，滤液再加硫酸铵（CP）同上操作，得复2次，收集25%～65%饱和度沉淀部分，得粗制滤饼。
提取液^{(NH₄)₂SO₄}→_分段盐析粗制滤饼
透析、盐析将粗滤饼用3倍体积的冷蒸馏水溶解，在低温下对pH5.5的乙酸缓冲液（0.01mol/L）透析，过滤，在清液加硫酸铵（CP）一定量，至硫酸铵饱和度达65%，将沉淀抽滤，得透析滤饼。
粗制滤饼^{pH5.5;醋酸缓冲液；(NH₄)₂SO₄}→_{透析；盐析}透析滤饼
盐析、除杂质将透析饼在3倍体积冷蒸馏水溶解，调节pH3～3.5，加硫酸铵（CP）一定量，至硫酸铵饱和度达25%，室温下放置3～5h后，用0.5%活性炭助滤，得澄清滤液。然后在不断搅拌下，将100ml的澄清滤液缓慢加入预热至25⁰左右的乙醇10ml（乙醇浓度达10%），在室温下放置3h后过滤，得澄清滤液。
透析滤饼^{(NH₄)₂SO₄乙醇;pH3}→_{盐析；去杂蛋白}滤液
盐析、透析、再盐析滤液加硫酸铵（CP）一定量，使硫酸铵达65%饱和度，盐析后过滤，得滤液。然后将硫酸在低温下对pH5.5乙酸缓冲液（0.01mol/L）透析2d，过滤除去沉淀，清液加硫酸宛如（CP）至65%饱和度，再盐析，过滤得滤饼。
滤液pH5.5;醋酸缓冲液；(NH₄)₂SO₄→_{盐析；透析；再盐析}滤饼
结晶、再结晶滤饼溶于3倍体积冷蒸馏水中，用硫酸（2.5mol/L）调节pH至3，用酸洗后滑石粉助滤，在不断搅拌下，于澄清滤液的每100ml中缓慢加入33.3ml的饱和硫酸铵溶液，将浑浊过滤除去。滤液用氢氧化钠（2mol/L）调节pH至6 ，再加入一定量饱和硫酸铵溶液至似混非混程度，于25⁰C下放置，待2h后即有结晶析出，次日收集结晶，得结晶滤饼。按上述操作程序得复结晶1次，得二次结晶滤饼。
滤饼^{(NH₄)₂SO₄;pH6;25⁰}→_{结晶；再结晶}再结晶滤饼
透析、沉淀在结晶滤饼中加入适量的稀盐酸，使之溶解。溶解后的滤饼对pH3～3.5的冰水透析，透析液滤清后，在低温下，每100ml透析滤清液中缓慢加入95%乙醇（CP）70ML，沉淀离心、过滤，用丙酮脱水3次，真空干燥，得注射用结晶糜胰蛋白酶原料。收率4～7g/kg（猪胰）。
再结晶滤饼^{冰水；乙醇；pH3}→_{透析；沉淀}结晶糜胰蛋白酶
透析、沉淀在结晶母液加硫酸铵一定量，使硫酸铵至70%饱和度，过滤，滤饼同上操作，得外用糜胰蛋白酶原料。
再结晶母液^{(NH₄)₂SO₄70%}→_{透析；沉淀}外用糜胰蛋白酶原料