甲基四氢叶酸钙

甲基四氢叶酸钙是重要的叶酸类衍生物，可以叶酸为反应物而制得。它在生物活性和药用价值等方面都具有很多优势。相比叶酸来说，甲基四氢叶酸钙可以作为食品添加剂或者药物，具有更好的生物利用度。因此，研究甲基四氢叶酸钙的合成具有重要意义。

甲基四氢叶酸钙可以通过酶法合成，具体包括如下步骤：(1)以叶酸为原料，使用锌粉将叶酸还原为二氢叶酸；(2)二氢叶酸中加入二氢叶酸还原酶，葡萄糖脱氢酶，反应得到四氢叶酸；(3)四氢叶酸中加入甲醛和硼氢化物反应得到甲基四氢叶酸；(4)甲基四氢叶酸成盐得到甲基四氢叶酸钙。本发明提供了一条行之有效的使用酶法制备甲基四氢叶酸钙的方法，这种制备方法不用拆分，反应温和，收率高，产品纯度高，环境友好，具有很好的产业化前景。

建立高效液相色谱法测定甲基四氢叶酸钙的分析方法。用C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以磷酸盐缓冲液，甲醇：磷酸盐缓冲液(35:65, V:V)为流动相，流速为1.1 mL/min，用高效液相色谱法进行测定；检测波长为280 nm。该方法检出限为0.015μg/mL，定量限为0.05μg/mL，相对标准偏差为0.31%。对供试品中甲基四氢叶酸钙的回收率达到114%；对5%目标物本底浓度加标回收率达到97.3%；对10%目标物本底浓度加标回收率达到98.5%。故可以得出结论，该方法检测准确，可靠，回收率均较高，适用于检测甲基四氢叶酸钙。

为观察甲基四氢叶酸钙的生理活性，以6S-5-甲基四氢叶酸钙为代表的研究对小鼠免疫力的影响。将小鼠分为低剂量组，中剂量组，高剂量组以及阴性对照组，每组各10只，低，中，高剂量组分别灌胃给予0.8 mg/(kg·d)，1.7 mg/(kg·d)，5.0 mg/(kg·d)甲基四氢叶酸钙，阴性对照组给予同等容积的饮用纯净水，观察甲基四氢叶酸钙对小鼠体重，胸腺/体重比，脾脏/体重比，小鼠脾淋巴细胞转化能力，迟发型超敏(DTH)反应，溶血空斑数，血清溶血素含量，碳廓清能力，巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力和自然杀伤细胞(NK cells)活性的影响。实验结果表明，甲基四氢叶酸钙能增强小鼠的免疫力。