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由多黏芽孢杆菌变种黏菌素（Bacillus polymyxa var.colistinus）发酵而得。
（1）日本旭化成株式会社工艺。将黏杆菌培养液干燥后制成硫酸盐。
（2）日本明治制药株式会社工艺。将发酵培养液调整PH，过滤除去固体，用离子交换树脂吸附液体中的黏杆菌素，洗脱后制成盐酸盐，再浓缩、干燥而得。

按美国专利2595605，在225L罐中制备含有以下成分的培养液；2%硫酸铵，0.2%磷酸二氢押，0.05%硫酸镁七水合物，0.05%氯化钠，0.001%硫酸铁七水合物，0.05%酵母浸膏，1%葡萄糖，1%碳酸钙和3%玉米粉。发酵培养液调pH7.3-7.4。于110℃灭菌30min。灭菌后pH为7，向培养液加225ml硫物油。发酵培养液用下面制备的Bacillus polymyxa菌种接种，用Trypticase大豆培养基在试管内于25℃培养过认的Bacillus Ploymyxa接种物。将5ml该接种物转移到100ml培养液中，该培养液盛于500ml锥形瓶中于室温培养48h，该100ml培养物接种于一罐内。发酵时向培养液通入空气，其速度为每分钟每发酵液体积0.3体积空气。温度保持在27℃。每8h取样一次，次定pH和污染情况及孢子情况。发酵88h后pH约6.3，应用大肠植菌（Escherichia Coli）检定每毫升含有多粘菌素1200单位。除去菌丝体，吸附活性成分于炭上，用酸性甲醇洗提对多粘菌素进行提取和精制。

农业部进口标准