总黄酮

山楂叶—总黄酮的测定—分光光度法

仪器设备： 1. 紫外-可见分光光度计
2. 索氏提取器
试样制备： 对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取20ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1 ml中含无水芦丁0.2mg的溶液。

本方法采用分光光度法测定山楂叶中总黄酮（以无水芦丁计算）的含量。
本方法适用于蔷薇科植物山里红crataegus pinnatifida bge.var.major n.e.br.或山楂crataegus pinnatifida bge.的干燥叶。

本品细粉置于索氏提取器中，依次加入三氯甲烷和甲醇提取，蒸干，加稀乙醇溶解，滤过，续滤液中依次加入水、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、氢氧化钠试液一定量，摇匀，放置，立即置紫外可见分光光度计, 于波长500nm处测定吸光度，以无水芦丁（c27h30o16）计算总黄酮含量。

1. 三氯甲烷
2 .5%亚硝酸钠溶液
3 .10%硝酸铝溶液
4.氢氧化钠试液

对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取20ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1 ml中含无水芦丁0.2mg的溶液。

1. 标准曲线的绘制
精密量取对照品溶液1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml，分别置25 ml量瓶中，各加水至6 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 供试品的测定
取本品细粉1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品储备液。取供试品储备液，滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml量瓶中，加水至6 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水芦丁的重量，计算。