"NCI-H295R Cell|人肾上腺皮质腺癌细胞
细胞背景资料:肾上腺皮质癌;女性
细胞形态:上皮细胞样
【细胞培养中支原体、黑蛟虫、真菌的污染情况总结】支原体:黑色的,HAO象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中Zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度;黑蛟虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,GAO倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良HAO,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提GAO细胞的生存率;真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。
细胞生长:贴壁
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细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
NCI-H295R Cell|人肾上腺皮质腺癌细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞培养时分布不均匀,通常操作步骤:做细胞生物学实验,细胞铺板大概是我们Zui常见的一个实验。但有时候铺得不是很均匀:要么中间密周围稀,要么周围密中间秃。下面为大家分享几点经验。尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶润洗一遍(25cm2培养瓶或6孔板),弃掉胰酶,37度消化2-3分钟或室温消化5min左右,镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够,延长消化时间。96孔板一般以100微升每孔接种,直接用100微升移液器吸取细胞悬液,沿孔壁(稍离开一点孔底即可,不要离底太GAO)直接接入,移液器不需完全打到Zui大,轻轻按下即可,每铺完一行换一次枪头同时轻轻混匀细胞悬液。都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不HAO),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。6孔板、12孔板或24孔板,可采用将每个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔依此类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板HAO掌握,效果没有96孔板HAO。培养瓶里面加HAO细胞以后(比如传代HAO/分HAO细胞以后),先顺时针摇晃3次,马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。
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细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁
经过40-50次分裂的渡过第二次死亡危机的细胞,称之为细胞系。如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系(FiniteCellLine);已获无限繁殖能力的细胞系,称连续或无限细胞系(InfiniteCellLine)。无限细胞系大多已发生异倍化,具异倍体核型,可能成为恶性细胞,因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有永生性(不死性),但仍保留接触抑制和无异体接种致死;有的有永生性,异体接种有致瘤性,说明已恶性化。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系,称亚系(Subline)。这是现有细胞系中多的一类,中国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成,多呈类上皮型细胞,常已传几十代或百代以上,并具有不死性和异体接种致瘤性,丧失接触抑制能力。对已建成的各种细胞系或细胞株习惯上都给以名称;细胞的命名无严格统一规定,大多采用有一定意义缩写字或代号表示。但不论什么形式,均不宜太长,以便记忆和了解。
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