"Karpas-422:人类B细胞淋巴瘤复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长:悬浮
可以这样说,对于需要消化传代的细胞,每一次的消化都是对这个细胞存活与否,状态HAO与不HAO至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题,自己养的细胞开始的几代长的还挺HAO的,可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了,状态越来越差劲了。对于这个问题,可以非常肯定地说,你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以,越长越差。在消化的过程中,你加入胰酶后,所有细胞都在被胰酶消化着,但是我们忽视了一个问题就是,细胞的生长状态是不一样的,每一个细胞的贴壁情况也是不一样的,有的贴壁牢固,有的贴壁没有那么牢固的,所以,让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的,他们受到了差别待遇当然会有脾气的,大家争取做到因材施教,比如试试下面的“四步消化法”。(以难消化细胞为例),具体操作:1)首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍(目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉)。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。(你可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更HAO一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)3)吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况把握)。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
NCIH727细胞类似产品::NCI-N87细胞、TN5B14细胞、SW1573细胞
WM-115细胞类似产品::NCIH1944细胞、MHHCALL2细胞、SK-BR-3细胞
EB3 [Human Burkitt lymphoma]细胞类似产品::Okayama University Medical School-27细胞、H929细胞、SW480E细胞
T241细胞类似产品::JeKo 1细胞、VMCUB1细胞、MRC5细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞背景资料:详见相关文献介绍
Karpas-422:人类B细胞淋巴瘤复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞形态:淋巴母细胞样
RPE1-hTERT细胞类似产品::H1993细胞、FRTL 5细胞、A2780S细胞
KRC Y细胞类似产品::L540细胞、B-95-8细胞、McG-1细胞
MNNG-HOS (Cl#5)细胞类似产品::P31-FUJ细胞、HCGC细胞、Hi-5细胞
常见培养细胞预防污染的有效措施:体外培养的细胞受到严重污染时,有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此,防止污染,预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终,才能将发生污染的可能性降到Zui小程度。一般预防可从以下几方面着手:1)添加抗生素:各种抗生素性质不同,对各种微生物的作用也不同,联合应用比单用效果HAO,预防性应用比污染后使用HAO(但迄今尚无对抗支原体抗生素)。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性,且对细胞本身也有一定影响,因此为避免诱导抗药细菌,应定期更换培养系统中的抗生素,或尽可能不用抗生素处理;2)从物品、用品消毒灭菌着手:细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌除菌要仔细,并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时,在无菌过滤操作中,随着滤过体积的增大,滤膜破损的可能性增加,故应选择Zui后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作:75%的酒精搽拭培养箱后,使用可移动的紫外灯至少消毒30min,加入GAO压灭菌过的超纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制300ml的饱和酸铜加3L灭菌超纯水混合成酸铜溶液加入水槽中。
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
Karpas-422:人类B细胞淋巴瘤复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分
贴壁细胞传代:去掉原T25培养瓶里面的培养基,T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次;弃PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化细胞,显微镜下观察,待细胞变圆,细胞间隙明显,部分细胞刚开始脱离瓶壁,加4 ml左右完全培养液混匀终止消化,将细胞小心吹打下来,1000rpm/min室温离心5min;弃上清,细胞沉淀用完全培养液重悬,按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶补足培养基至5-6ml,37℃、5%CO2孵箱培养。悬浮细胞传代:一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,将细胞悬液移入离心管中,1000rpm/min 室温离心5min。弃上清,细胞沉淀用完全培养液重悬,按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培养液至4-5ml,37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长,此时细胞生长状态良HAO,当补液时,需避免反复吹打。
Mouse Colon 38细胞类似产品::KTC1细胞、SNU-484细胞、MDA-231细胞
NCI-H498细胞类似产品::RPE1-hTERT细胞、B16 subline B78细胞、22Rv-1细胞
Caov-4细胞类似产品::IR983F细胞、Cor L51细胞、SW13细胞
UCLA-SO-M21细胞类似产品::NK92MI细胞、STO细胞、MV-3细胞
Hs840T细胞类似产品::BTI-Tn5B14细胞、NCI H548细胞、HT-55细胞
CAL-27细胞类似产品::CAL-51细胞、My-La 2059细胞、NCI-747细胞
Clone 166细胞类似产品::CCD-33Co细胞、COLO 320F细胞、SV40 MES 13细胞
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NCI H226细胞类似产品::Human Microvascular Endothelial Cell line-1细胞、HCC78细胞、BAR-T细胞
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SNU251细胞类似产品::LS 513细胞、L-Wnt-3A细胞、AN3-CA细胞
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Karpas-422:人类B细胞淋巴瘤复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
B16BL6细胞类似产品::HEI193细胞、Rat Basophilic Leukemia-1细胞、MSF细胞
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NCI-H441-4细胞类似产品::H1975细胞、BNL.1ME A.7R.1细胞、Human Corneal Endothelial Cells-12细胞
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KYSE 450细胞类似产品::Med 283细胞、WM239细胞、SNU354细胞
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TE-11细胞类似产品::HuPT4细胞、COV434细胞、RPMI6666细胞
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