"NCI-H441 Cell|人肺腺癌细胞
细胞背景资料:NCI-H441建系于1982年(A.F.Gazdar,etal.)。该细胞分离自一名肺腺癌患者的心包液。该细胞能在半固体琼脂糖中形成克隆,并能表达肺泡表面活性蛋白A。该细胞在有血清培养基中倍增时间为58小时,在无血清培养基中倍增时间为99-138小时。
细胞形态:上皮细胞样
养了几年细胞,说一点自己培养细胞方面的看法:1)培养细胞前,可以看看细胞点说明书,包括细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等;2)不同细胞生长周期不同,有的生长很快,比如说MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了,有的又是别慢,等的人心焦,BT474就是,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满,所以就要在培养细胞的过程中多多摸索了;3)对于娇弱的细胞,就得细心呵护了,胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间,每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况;4)冻存细胞复苏后第二天ZuiHAO更换一次培养基;5)培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次;6)养细胞Zui大的教训:不能偷懒!细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋。1)不管买的细胞、惠赠的细胞,刚拿到手赶紧做两件事:检测是否有支原体污染; 迅速扩增冻存;2)发现有污染迅速处理掉,别是当你养了很多种细胞时; 细菌污染,真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,买个支原体检测的kit定期检测一下;3)传代细胞日常的值日清洁是必须的,此外还要定期熏蒸;4)细胞的传代一定要规律,保持相同的confluency和传代时间间隔,不要随心所欲或者拖延;5)注意个人卫生。
细胞生长:贴壁
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细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
NCI-H441 Cell|人肺腺癌细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞培养过程中,总是会出现各种意想不到的问题,一不留神就会全盘皆输。所谓细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋。下面是贴壁细胞的保藏方法,希望对细胞培养初学操作者有所帮助:1)观察细胞状态:贴壁细胞密度达到85-90%,即可以细胞冻存形式进行保藏,拍照,记录细胞状态;2)细胞清洗:培养皿表面消毒后,转移至生物安全柜中,去除培养皿中培养液,加入12mlPBS,轻轻摇晃培养皿清洗细胞,随后吸除PBS清洗液;3)细胞消化:将2ml胰酶加入培养皿中,完全覆盖细胞,置于显微镜下观察(期间禁止摇晃培养皿),当细胞刚开始脱落时,立即转移至生物安全柜中,除去大部分胰酶,剩余约0.5ml胰酶,转移至培养箱内继续消化,每30秒肉眼观察细胞状态,至细胞成流沙状完全脱落,转移至生物安全柜中,加入12ml完全培养基,终止消化;4)细胞离心:将终止消化后的细胞悬液吹打均匀,吸取至15ml离心管中,1000r/min(110g),离心3min;5)细胞冻存:离心后去除细胞上清液,按照冻存细胞量5*10^5/ml,吸取冻存液重悬细胞沉淀,吹打均匀后分装至相应的冻存管中,进行冻存;6)细胞保藏:冻存管做HAO标记,放至程序降温盒中,于4℃冰箱放置30min,转移至-80℃超低温冰箱过夜,将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。
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细胞传代方法:1:3传代,2-3天传一代
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁生长
细胞系(cell line)指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 也指可长期连续传代的培养细胞。(由此便引申出了后来的有限细胞系(FiniteCellLine)、无限细胞系(InfiniteCellLine)),因此,细胞系狭义的是指可连续传代的细胞(定环境下口语和书面语都使用),广义是指可传代的细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成,多呈类上皮型细胞,常已传几十代或百代以上,并具有不死性和异体接种致瘤性,丧失接触抑制能力。国际上美、英和日本等国已建有细胞库;美国已有美国标准细胞库或细胞银行(ATCC)和人遗传突变细胞库(HGMR)、细胞衰老细胞库(CAR)等,其中ATCC不仅是美国也世界大的细胞库。细胞系建立要求:什么样的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞,视具体情况而定,无统一规定。对于用作原代培养的细胞只要供体均一,取材部位及组织种类等条件稳定即可,如用做长期培养,别是反复传代的细胞,常需做如下说明:组织来源:细胞供体所属物种,来自人体或者动物;个体性别、年龄;取材的器官或组织。如系肿瘤组织,应说明临床和病理诊断,以及病历号等。细胞生物学检测:了解细胞一般和殊的生物学性状,如细胞一般形态,异结构,细胞生长曲线和分裂指数,倍增时间,接种率等。如为肿瘤细胞,为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性,须做软琼脂培养,异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。培养条件和方法;应说明细胞系(或株)适应的生存环境,即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。
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