人表皮黑色素细胞提取物图片

细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
以下是人表皮黑色素细胞提取物图片的订购信息：

人表皮黑色素细胞提取物是从人原代表皮黑色素细胞提取的，人原代表皮黑色素细胞从正常人表皮黑色素组织制备。正常人表皮黑色素组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人表皮黑色素组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
实验报告：
一分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
羟丙基甲基纤维素Human ADC(Arginine decarboxylase) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human NRTN(Neurturin) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human AXIN2(Axin-2) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human PPP1CA(Serine/threonine-protein phosphatase PP1-alpha catalytic subunit) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human VASP(Vasodilator-stimulated phosphoprotein) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human TRIM3(Tripartite motif-containing protein 3) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human TOP1(DNA topoisomerase 1) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human PTPRF(Receptor-type tyrosine-protein phosphatase F) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human AFM(Afamin) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human ASS1(Argininosuccinate synthase) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human TNFAIP2(Tumor necrosis factor alpha-induced protein 2) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human CDA(Cytidine deaminase) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human AXIN1(Axin-1) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human DPEP1(Dipeptidase 1) ELISA Kit

羟丙基甲基纤维素Human SERPINB1(Leukocyte elastase inhibitor) ELISA Kit
人表皮黑色素细胞提取物图片 N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐（HDAOS)L-(-)-葡萄糖 98%17-Hydroxypregnenolone ELISA Kit

 1,4-双(5-苯基-2-恶唑基)苯(POPOP)D-甘露糖 99%17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit

 2,5-二苯基恶唑D-甘露糖 分析标准品17-Hydroxycorticosteroids,17-OHCS ELISA Kit

 对甲苯胺蓝(BCIP)D(+)-密二糖，一水 99%17-α-hydroxylase,17-α-OH ELISA Kit

 奥啉酸D(+)-密二糖，一水 分析标准品16-αHydroxyestrogen 1,16-α OHE-1 ELISA Kit

 3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸（HTBA）甲基-а-D-吡喃半乳糖苷 98%15-PGDH ELISA Kit

 3,3-二甲氧基联苯胺盐酸盐3-甲基-2-苯并噻唑酮腙盐酸盐，水合 98%15-epi-Lipoxin A4,15-epi-LXA4 ELISA Kit

 5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸麦芽三糖 96%YWHAB ELISA kit

 2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)麦芽三糖 分析标准品12-lipoxygenase,LOX-12 ELISA Kit

 1,8-二氮-9-芴酮(DFO)D(+)松三糖，一水 99%12-hydroxyeicosatetraenoic acid,12-HETE ELISA Kit

 异硫氰酸荧光素(FITC-I)α-甲基-D-甘露糖苷 99%11-Deoxycortisol ELISA Kit

 4-氟-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑(NBD-F)D-甘露糖 for cell culture,≥99%11-dehydro-thromboxane B2,11-DH-TXB2 ELISA Kit

 4-氯-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑(NBD-Cl)5-氯吡嗪-2-羧酸甲酯 98%11β-HSD1 ELISA kit
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.