大鼠脑静脉血管内皮细胞培养

细胞冻存：
对培养的细胞进行冻存的方法是将细胞置于含有(DMSO)等冷冻保护剂的完全培养基中于液氮中储存。冷冻保护剂可降低培养基的冰点，并可减缓冷却速度吗，大大降低冰晶形成的危险  (冰晶可损伤细胞，导致细胞死亡)。
注：DMSO 可促进有机分子进入组织。操作含DMSO的试剂时，应采用与此类物质安全危害相适应的设备和操作规范，并应按照当地法规处置此类试剂。 
细胞冻存指导原则
冻存细胞系以备将来之用时，必须遵守以下原则。与其他细胞培养操作一样，我们建议您严格遵守您所用细胞系附带的操作说明，以便获得结果。 
1）在高细胞浓度情况下进行培养细胞的冻存，并且细胞传代次数尽可能少。确保冻存前活细胞百分比至少为90%。请注意冻存条件取决于所用细胞系。 
2）细胞应缓慢冷冻，可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器使温度每分钟大约降低1°C。
3）必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂
4）将冷冻的细胞于 -70°C 以下温度储存；温度高于 -50°C 时，冷冻的细胞将开始变质。 
5）必须使用无菌冻存管储存冷冻的细胞。装有冷冻细胞的冻存管可浸于液氮或者在液氮上方的气相空间内保存 
6）必须穿戴个人防护设备。 
7）所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态。必须采用正确的无菌技术，并且在层流通风橱内进行。
       产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的人源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据国际标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。在公司技术部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

      发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。公司提供的细胞有标准的鉴定流程，保证细胞的纯度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右完全培养基；2、说明书及注意事项；3、公司售后服务标准。

      保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。

操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线

N-十二烷基-2-吡咯烷酮Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit

衣康酸二甲酯Human KLK1(Kallikrein-1) ELISA Kit

衣康酸二甲酯Human KLK5(Kallikrein-5) ELISA Kit

马来酸二甲酯Human LN(Laminin) ELISA Kit

3,6-二溴菲醌Human LEP(Leptin) ELISA Kit

3,6-二溴菲醌Human Leptin R(Leptin receptor) ELISA Kit

2,4-二氯吡啶Human LIFR(Leukemia inhibitory factor receptor) ELISA Kit

2,4-二氯吡啶Human LUM(Lumican) ELISA Kit

二苯醚Human MCP-1(Monocyte Chemotactic Protein 1) ELISA Kit

二苯醚Human MDC(Macrophage Derived Chemokine) ELISA Kit

二苯醚Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) ELISA Kit

1,3-二氯-5,5-二甲基乙内酰脲Human C-ERC(Mesothelin) ELISA Kit

硫酸二甲酯Human MFGE8(Lactadherin) ELISA Kit

硫酸二甲酯Human MIA(Melanoma Inhibitory Activity Protein 1) ELISA Kit

4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）Human MK(Midkine) ELISA Kit
大鼠脑静脉血管内皮细胞培养C/EBP Epsilon (Human CCAAT/enhancer binding protein epsilon) ELISA Kit  人CCAAT增强子结合蛋白ε嗜热菌杀酵母素 98%Legionella pneumophila antigen,LP Ag ELISA Kit

C/EBP Delta(Human CCAAT/enhancer binding protein deta) ELISA Kit  人CCAAT增强子结合蛋白δ假单胞菌酸  95% Retinoic Acid ELISA Kit

C/EBP Alpha(Human CCAAT/enhancer binding protein alpha) ELISA Kit  人CCAAT增强子结合蛋白α尼日利亚菌素钠 98%Orexin receptor ELISA Kit

C.albicans(Human Candida Albicans) ELISA Kit  人白色念珠菌寡霉素A 95%Orexin B,OX-B ELISA Kit

C I CP(Mouse cross-linked C-telopeptides of Type I collagen) ELISA Kit  小鼠Ⅰ型前胶原C末端肽寡霉素B 80%Somatostatin,SS ELISA Kit

C I CP(Human cross-linked C-telopeptides of Type I collagen) ELISA Kit  人Ⅰ型前胶原C末端肽赭曲毒素A 98%growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA Kit

C I CP ELISA Kit  大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽氨基核苷嘌呤霉素 98%Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit

BV(Human bacterial vaginosis) ELISA Kit  人细菌性阴道病根赤壳菌素 98%Growth Hormone Binding Protein,GHBP ELISA Kit

BTC(Human beta cellulin) ELISA Kit  人β细胞素星形孢菌素 98%growth hormone,HGH ELISA KIT

BTC ELISA Kit   大鼠β细胞素柄曲菌素 98%GDF-9 ELISA Kit

BTA(Human Bladder tumor antigen) ELISA Kit  人膀胱肿瘤抗原柄曲菌素 分析标准品Growth/differentiation factor 3 ELISA kit

BTA ELISA Kit  大鼠膀胱肿瘤抗原链黑霉素 98%growth differentiation factor 2,GDF2 ELISA Kit

BSP(Human bone sialoprotein) ELISA Kit  人骨涎蛋白衣霉素  98%growth differentiation factor 15,GDF15 ELISA Kit
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。