PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称：玉米BT PCR检测试剂盒
英文名称：详见说明书
编号： FSP2774
分类：PCR检测试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 产品仅供科研从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的吸收光谱在 500nm，发射光谱在 530nm。
数据处理:
以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴，以 Ct 值为纵轴，通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
Human A16-IgM(Coxsackie virus A16-Immunoglobulin M) ELISA KitHuman BIRC7(Baculoviral IAP repeat-containing protein 7) ELISA Kit2-羟基-4-三氟甲基嘧啶 细胞PDGF-B蛋白表达荧光定量检测试剂盒
Human Mammaglobin B ELISA KitHuman BK(Bradykinin) ELISA Kit8-羟基-1,3,6-芘三磺酸三钠 PDGF-B蛋白表达西方杂交分析试剂盒
Human PST(Pancreastatin) ELISA KitHuman BLVRA(Biliverdin Reductase A) ELISA Kit8-羟基-1,3,6-芘三磺酸三钠PDGF-B蛋白免疫共沉淀分析试剂盒
Human AXA1(apRataxin) ELISA KitHuman BLVRB(Biliverdin Reductase B) ELISA Kit4-羟甲基苯硼酸PDGF-B蛋白表达ELISA定量检测试剂盒
Human SH3BP2(SH3 Domain Binding Protein 2) ELISA KitHuman BMF(Bcl-2 Modifying Factor) ELISA Kit4-羟甲基苯硼酸 细胞VEGF蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒
Human SAT1(Diamine acetyltransferase 1) ELISA KitHuman BMP-3(Bone Morphogenetic Protein 3) ELISA Kit氧化钬载玻片细胞VEGF蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
Human IFNA2(Inteferon alpha 2a) ELISA KitHuman BNP(Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit氧化钬冰冻切片组织VEGF蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
Human SCUBE2(Signal peptide, CUB and EGF-like domain-containing protein 2) ELISA KitHuman C/EBPα(CCAAT/Enhancer Binding Protein Alpha) ELISA Kit4-羟基-2-甲基喹啉石蜡切片组织VEGF蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒
玉米BT PCR检测试剂盒补体片断5a检测试剂盒100mg六氟酸四丁胺HPLC98%100mLComplement fragment 5a,C5a ELISA KitHPLC98%补体片断5a检测试剂盒100mgANP25mgCAS号：胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂 TSA-YE53123-88-93458-28-496T精氨酸加压素受体1A(AVPR1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体片断5a检测试剂盒100mgANP高端化学试剂钙粘蛋白EGF LAG七经G-型受体2(CELSR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)200mgCAS号：SOC固体培养基(干粉)7562-61-057-48-796T原钙黏素1(PCDH1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC99%补体片断4b检测试剂盒100mgAsprosin17924-92-4高端化学试剂弹性蛋白微原纤维界面因子2(EMILIN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
补体片断4b检测试剂盒100mg六氟酸四丁胺HPLC99%100mLComplement fragment 4b,C4b ELISA KitHPLC99%补体片断4b检测试剂盒100mgAsprosin200mgCAS号：SOC固体培养基(干粉)7562-61-057-48-796T原钙黏素1(PCDH1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC99%补体片断4b检测试剂盒100mgAsprosin17924-92-4高端化学试剂弹性蛋白微原纤维界面因子2(EMILIN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)125mgCAS号：伊红美兰琼脂7562-61-050-69-196T乳腺癌易感蛋白2(BRCA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)GC98%补体片断3b检测试剂盒100mgPA-CD41IgG17924-92-4高端化学试剂络丝蛋白(RL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
补体片断3b检测试剂盒100mg3-磺酸丙基甲基丙烯酸钾盐GC98%100mLComplement fragment 3b,C3b ELISA KitGC98%补体片断3b检测试剂盒100mgPA-CD41IgG125mgCAS号：伊红美兰琼脂7562-61-050-69-196T乳腺癌易感蛋白2(BRCA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)GC98%补体片断3b检测试剂盒100mgPA-CD41IgG17924-92-4高端化学试剂络丝蛋白(RL)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)60tablesCAS号：乙酰胺琼脂9041-93-450-70-496T葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体片断3a检测试剂盒20mgPA-IgG66-76-2高端化学试剂成纤维细胞生长因子18(FGF18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
补体片断3a检测试剂盒20mg3-磺酸丙基甲基丙烯酸钾盐HPLC98%100mLComplement fragment 3a,C3a ELISA KitHPLC98%补体片断3a检测试剂盒20mgPA-IgG60tablesCAS号：乙酰胺琼脂9041-93-450-70-496T葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体片断3a检测试剂盒20mgPA-IgG66-76-2高端化学试剂成纤维细胞生长因子18(FGF18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)1.78mgCAS号：B5培养基（含琼脂、蔗糖）9041-93-458-85-596TBcl2关联X蛋白(Bax)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体片段4d检测试剂盒20mganthracis Ab66-76-2高端化学试剂成纤维细胞生长因子18(FGF18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
补体片段4d检测试剂盒20mg三氟乙酸铑二聚体HPLC98%100mLComplement Fragment 4d,C4d ELISA KitHPLC98%补体片段4d检测试剂盒20mganthracis Ab1.78mgCAS号：B5培养基（含琼脂、蔗糖）9041-93-458-85-596TBcl2关联X蛋白(Bax)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体片段4d检测试剂盒20mganthracis Ab66-76-2高端化学试剂成纤维细胞生长因子18(FGF18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)350mgCAS号：1/2 MS培养基（含琼脂和蔗糖）9041-93-413063-54-296TB-细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体片段3d检测试剂盒20mg25-OHC11006-34-1高端化学试剂成纤维细胞生长因子11(FGF11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
补体片段3d检测试剂盒20mg三氟乙酸铑二聚体HPLC98%100mLComplement Fragment 3d,C3d ELISA KitHPLC98%补体片段3d检测试剂盒20mg25-OHC350mgCAS号：1/2 MS培养基（含琼脂和蔗糖）9041-93-413063-54-296TB-细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体片段3d检测试剂盒20mg25-OHC11006-34-1高端化学试剂成纤维细胞生长因子11(FGF11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)25mgCAS号：SOB固体培养基(干粉)37091-65-910284-63-696T凋亡相关因子(FAS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%补体片段3c检测试剂盒20mgLIPF11006-34-1高端化学试剂成纤维细胞生长因子12(FGF12)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
补体片段3c检测试剂盒20mg四丁基溴化HPLC95%100mLComplement fragment 3c,C3c ELISA KitHPLC95%补体片段3c检测试剂盒20mgLIPF25mgCAS号：SOB固体培养基(干粉)37091-65-910284-63-696T凋亡相关因子(FAS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC95%补体片段3c检测试剂盒20mgLIPF11006-34-1高端化学试剂成纤维细胞生长因子12(FGF12)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)200mgCAS号：Candida Chromogenic Medium 念珠菌显色培养基 1000ml37091-65-9106577-39-396T血管内皮钙黏蛋白(CDH5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体片段3b受体检测试剂盒5mgHSP gp9611006-34-1高端化学试剂成纤维细胞生长因子13(FGF13)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
补体片段3b受体检测试剂盒5mg四丁基溴化HPLC98%100mLC3bR ELISA KitHPLC98%补体片段3b受体检测试剂盒5mgHSP gp96200mgCAS号：Candida Chromogenic Medium 念珠菌显色培养基 1000ml37091-65-9106577-39-396T血管内皮钙黏蛋白(CDH5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体片段3b受体检测试剂盒5mgHSP gp9611006-34-1高端化学试剂成纤维细胞生长因子13(FGF13)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)350mgCAS号：Middle Brook 7H10 琼脂112811-59-333783-82-396T血管内皮钙黏蛋白(CDH5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体蛋白9检测试剂盒5mgIFN-a-2b519-62-0高端化学试剂白介素34(IL34)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
补体蛋白9检测试剂盒5mg四丁基溴化HPLC98%100mLC9 ELISA KitHPLC98%补体蛋白9检测试剂盒5mgIFN-a-2b350mgCAS号：Middle Brook 7H10 琼脂112811-59-333783-82-396T血管内皮钙黏蛋白(CDH5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体蛋白9检测试剂盒5mgIFN-a-2b519-62-0高端化学试剂白介素34(IL34)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)0.7mlCAS号：1%吐温80-玉米琼脂培养基基础112811-59-368027-15-696T血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体蛋白5检测试剂盒5mgGAP479-61-8高端化学试剂白介素17F(IL17F)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
补体蛋白5检测试剂盒5mg5-溴吡啶-2-甲醛HPLC98%100mLComplement 5,C5 ELISA KitHPLC98%补体蛋白5检测试剂盒5mgGAP0.7mlCAS号：1%吐温80-玉米琼脂培养基基础112811-59-368027-15-696T血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体蛋白5检测试剂盒5mgGAP479-61-8高端化学试剂白介素17F(IL17F)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)125mgCAS号：马铃薯浸出粉112811-59-3203923-89-196T血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)HPLC98%补体蛋白4检测试剂盒20mgGD2548-62-9高端化学试剂色素上皮衍生因子(PEDF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
