嗜中性粒细胞抗原CD177抗体

抗体制备过程：

1.材料与试剂

  a．提取的动物 Ig

  b．弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂

  c．青霉素和链霉素

  d．实验动物 兔

  e．其它材料及试剂

2、选择实验活体。

3、产品仅用于科研进行动物免疫实验。

4、试取血样进行测试，查看免疫效果。

5、如果免疫成功，杀死实验活体，采集全部血清。

6、纯化出抗体。

7、鉴定抗体。胎牛血清（无菌采制）

参数规格：

产品应用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

（石蜡切片需做抗原修复）
英文名称  Anti-CD177/NB1 

中文名称  嗜中性粒细胞抗原CD177抗体  

别    名  NB1 GP;PRV-1;HNA-2a;NB1 glycoprotein;Neutrophil Glycoprotein NB1; RGD1562941; CD177 antigen; Polycythemia rubra vera protein 1; PRV-1; NB1 glycoprotein; NB1 GP; Human neutrophil alloantigen 2a; HNA-2a; CD177; CD177_HUMAN; CD177_MOUSE.

浓    度  1mg/1ml

规 格  0.2ml/200μg     

抗体来源  Rabbit  

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Guinea Pig   

产品类型  一抗    
研究领域  免疫学 细胞表面分子 糖蛋白  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 48/90(hu/mo, rat)kDa

性    状  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from rat CD177

亚    型  IgG

纯化方法  affinity purified by Protein A

储 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide

抗体的制备过程：

1. 免疫原的制备

普通的大分子蛋白，通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白，纯化鉴定后可直接作为免疫原。

小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原，常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫动物

常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等，大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集

一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血，家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血，家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。

4. 免疫血清的纯化与鉴定

得到的抗血清需要进一步的纯化，利用偶联了抗原的亲和柱进行层析，具有高效，特异性强，纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。

5. 免疫血清的保存

建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价，而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
抗体分子标记技术：

（一）原理

当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。

（二）准备

1.试剂

经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；

2.仪器

凝胶过滤柱；￥-记数器；玻璃纤维滤。

（三）操作要点

1.产品仅用于科研用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；

2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；

4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。

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