hCMEC/D3细胞：永生化人脑微血管内皮细胞系

"hCMEC/D3细胞：永生化人脑微血管内皮细胞系
细胞背景资料：脑微血管；内皮细胞
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁
为什么培养的细胞要及时传代？体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的特性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生长，及时传代后，细胞的生长得以继续。培养细胞生长减慢的原因在哪些?其解决办法有哪些？可能的原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷眈肢或生长因子等耗尽或缺乏或己被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清等，找出其它可能的原因。解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷酷肢或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，去弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培养液需在２-８℃避光保存;含血清完全培养液在２-８℃保存，并在２周内用完;分离培养物，检测支原体。冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入３７℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在１-２分钟内大部分融化，特别注意，需残留一小块冰块，就可拿到超净工作台操作细胞，用７５%酒精消毒冻存管，用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管爆裂。
细胞冻存复苏材料与方法步骤：常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器，规格有３５L和５０L两种。使用时要注意以下几点：(１)一般两周需充液氮一次，至少一个月充氮一次。液氮温度达-１９６℃，使用时注意勿让液氮溅到皮肤上，以免引起冻伤。(２)液氮容器为双层结构，中间为真空层，瓶口有双层焊接处，应防止焊接部裂开。(３)在装入液氮时，要注意缓慢小心，并用厚纸卷筒或特制漏斗作引导，使液氮直达瓶底，如有专用液氮灌注装置则更好。若为初次使用，加液氮时更要缓慢，以免温度骤降而使容器损坏。细胞冻存时常备的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培养液，DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(１２１°C蒸气高压消毒)，２mL安瓿(或专用细胞冻存管)、吸管、离心管、喷灯、纱布袋(或冻存管架)等。主要操作步骤为：(１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为３×１０６～１×１０７/mL之间。(３)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装１～１.５mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(４)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入４℃冰箱中２～３小时，再移至冰箱冷冻室内３～４小时，再吊入液氮容器颈气态部分存放２小时，最后沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
细胞传代的一般方法：开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(MEM-０.２%LH培养液或MEM培养液或１９９等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（１万单位）、７.５％NaHC０３溶液、０.２５％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(１００m１)、克氏瓶、胶塞、吸管(１０ml、１m１）、细胞吹打管（２０ml）(以上用具需经１２１℃至少１５分钟高压灭菌)、C０２ 孵箱、超净台、倒置显微镜、４℃、-２０℃冰箱；操作步骤：镜检细胞，挑选生长状态良好，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。配制细胞培养液：按以下配比配制MEM-０.２%LH培养液１００ml内，加入灭活小牛血清１０m１，庆大霉素溶液０.３m１，７.５%碳酸钠溶液３ml。（仅供一般参考）。消化细胞；先用PBS洗液冲洗细胞表面１-２次，每次１０m１，弃去洗液，向细胞瓶内加入０.２５％胰蛋白酶溶液，每瓶１m１，细胞瓶平放，使消化液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入１０m１细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(１００m１)中，再加入１０m１细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。加塞，置于３７±１℃孵箱培养。约２～４天成片。(由细胞接种浓度决定)；填写传代记录。
CEM-T4细胞系相关产品：MDA-MB 468细胞、OCI-AML-2细胞、MDCK (NBL-2)细胞
ANA-1细胞系相关产品：RBE4细胞、Rat 2细胞、NCI-460细胞
NPC-TW 01细胞系相关产品：SK-OV-3细胞、V79-4细胞、BLO11细胞
Gejiu Lung Carcinoma-82细胞系相关产品：NCI-H1395细胞、87 MG细胞、OCILY-3细胞
SiHa细胞系相关产品：SW 620细胞、HCT8细胞、A.704细胞
SUDHL-2细胞系相关产品：LP-1细胞、SK-N-BE-2细胞、8226细胞
H735细胞系相关产品：Hs 934.T细胞、IPLB-Sf21AE细胞、CAL 12细胞
NRK-52E细胞系相关产品：Wistar Institute, Susan Hayflick细胞、Mia PACA 2细胞、PC9细胞
BLO11细胞系相关产品：H508细胞、H522细胞、C918细胞
SW 13细胞系相关产品：CCD18Co细胞、UMUC-14细胞、CAOV4细胞
HCASMC细胞系相关产品：NR-8383细胞、J-774细胞、MA-104细胞
Z138细胞系相关产品：NCI-H520细胞、HeLa 229细胞、KATOIII细胞
SU-DHL-2细胞系相关产品：KTA7细胞、KOSC-2 cl3-43细胞、Rainbow Trout Embryo细胞
SK-RC 42细胞系相关产品：SW 13细胞、Hs 870.T细胞、USMC细胞
H-220细胞系相关产品：Cor L51细胞、SV-HUC-1细胞、PK 15细胞
MDA 435细胞系相关产品：SP2细胞、A-375.S2细胞、T47D细胞
MDA 435细胞系相关产品：SP2细胞、A-375.S2细胞、T47D细胞
B16F1细胞系相关产品：870细胞、IPLB-Sf21细胞、BALB/3T3 cl. A31细胞
MGH-U3 (RN)细胞系相关产品：P3X63Ag8细胞、MCF-10 Attached细胞、BV-173细胞
FRO细胞系相关产品：NCI-H441-4细胞、hUC-MSC细胞、H716细胞
Co 115细胞系相关产品：COLO829细胞、JHH7细胞、NCIH1688细胞
HLF-a细胞系相关产品：TW01细胞、MDAMB330细胞、COLO.205细胞
High-5细胞系相关产品：NCIH446细胞、CL-40细胞、HCC-1359细胞
C33A细胞系相关产品：NCIH1770细胞、HCC2157细胞、Chinese Hamster Ovary细胞
OCI-Ly 3细胞系相关产品：32Dc3细胞、LA 4细胞、SR-786细胞
OCI Ly19细胞系相关产品：H-3255细胞、M-20细胞、HCC70细胞
MS751细胞系相关产品：INS1细胞、EJ 138细胞、HEK-293 c18细胞
K-562细胞系相关产品：GFP-Olig2细胞、Colo205细胞、H3255细胞
LAN5细胞系相关产品：SW 1463细胞、293GP细胞、H295细胞
Porcine Kidney-15细胞系相关产品：PLA801C细胞、LS-1034细胞、8305C_1细胞
Farage细胞系相关产品：NRK clone 52E细胞、NTera2/D1细胞、H-1522细胞
HSC3细胞系相关产品：Panc3_27细胞、NCI-H498细胞、HuTu-80细胞
CV-1 in Origin Simian-7细胞系相关产品：MCF-7/ADR细胞、U937细胞、Vero C1008细胞
MCM细胞系相关产品：P-36细胞、C3H 10T1/2细胞、MFE280细胞
NCIH295R细胞系相关产品：TI-73细胞、NCIH1755细胞、NCI-H2591细胞
HOS/MNNG细胞系相关产品：H-2347细胞、Centre Antoine Lacassagne-51细胞、JROECL19细胞
OV1063细胞系相关产品：KYSE-30细胞、Colon38细胞、KMS-18细胞
SK-MEL-2细胞系相关产品：SNU638细胞、Mouse Bladder Tumor line-2细胞、CCD 841 CoN细胞
OVCAR 433细胞系相关产品：COLO394细胞、SMMC7721细胞、RPMI 8226细胞
C166细胞系相关产品：MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII细胞、NCI-SNU-601细胞、NCI-H847细胞
UMC-11细胞系相关产品：Human Embryo Kidney-2细胞、TSCCa细胞、SNU-620细胞
H524细胞系相关产品：MN-60细胞、H1781细胞、GM3569细胞
CEM T4细胞系相关产品：DHL5细胞、Douglas Foster-1细胞、NPA 87细胞
HOP 92细胞系相关产品：WiDr/S细胞、624mel细胞、DI-TNC1细胞
HaCaT细胞系相关产品：HO-1-N-1细胞、Be Wo细胞、MGSMC细胞
Mono-Mac-6细胞系相关产品：KP-N-NS细胞、OSA细胞、P 815细胞
COLO 320F细胞系相关产品：G-402细胞、IAR-20细胞、Immortalized Human Hepatocytes细胞
HMC-1细胞系相关产品：ML-2细胞、NCI-H711细胞、H35 Reuber细胞
Hs819T细胞系相关产品：HS-766-T细胞、U2OS细胞、INS1-E细胞
MSB-1细胞系相关产品：WEHI3细胞、MC57细胞、NBL-5细胞
ECC 10细胞系相关产品：LC1-Sq细胞、HCC-2218细胞、HEEpiC细胞
HMSC细胞系相关产品：A2780CP细胞、SNU-387细胞、KU.812细胞
X63-Ag8.653细胞系相关产品：LU451细胞、H-196细胞、SHIN3细胞
Medical Research Council cell strain-5细胞系相关产品：SupT1细胞、G 292 Clone A 141B1细胞、IR983F细胞
HUVEC细胞系相关产品：QG-56细胞、HCC0078细胞、CL1-5细胞
NCI-H1155细胞系相关产品：H-146细胞、MDCK-II细胞、RSMC细胞
NOZAWA细胞系相关产品：ME180细胞、NCI-SNU-878细胞、HepaRG细胞
Vx2细胞系相关产品：697细胞、NCIH2196细胞、Psi-2 DAP细胞
HECV细胞系相关产品：CCD 19Lu细胞、NCTC 3960细胞、PANC-28细胞
HRCEC细胞系相关产品：Calu3细胞、McArdle RH-7777细胞、OCI-Ly 10细胞
MDAMB436细胞系相关产品：SW-1990细胞、UMR-106细胞、SJRH-30细胞
NCI-H1930细胞系相关产品：TCC Sup细胞、Hs695细胞、NCI-H1793细胞
OC316细胞系相关产品：COLO320HSR细胞、WEHI-279细胞、Human Embryo Kidney-2细胞
Ly18细胞系相关产品：NCIH28细胞、TC-1 [Mouse lung]细胞、P3.times.63 Ag8.653细胞
JROECL33细胞系相关产品：LS-411N细胞、HEK AD293细胞、OCI-AML5细胞
TE-85 clone 5细胞系相关产品：TE6细胞、MRC-5细胞、FT-293细胞
Be-Wo细胞系相关产品：BC-022细胞、SIRC细胞、3T3(A31)细胞
COLO320-DM细胞系相关产品：HuO9细胞、RBMEC细胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3细胞
C-6细胞系相关产品：MRC9细胞、JIMT细胞、GM-637细胞
4T1.2细胞系相关产品：SHG-44细胞、143 B细胞、Colon26细胞
MCF-7/ADR-RES细胞系相关产品：PT67细胞、SMA 560细胞、C32 [Human melanoma]细胞
BNL CL2细胞系相关产品：BT 20细胞、MCA205细胞、Hs 870.T细胞
NPC-TW 01细胞系相关产品：SK-OV-3细胞、LNCaP-C4-2细胞、H-2342细胞
NCIH2085细胞系相关产品：IPI-2I细胞、OCI-AML3细胞、KHYG细胞
"