SW480细胞：人结肠癌细胞系

"SW480细胞：人结肠癌细胞系
细胞背景资料：SW４８０源自一位５１岁白人男性患者的原位直肠腺癌，而SW６２０源自同一病人一年后的淋巴结转移灶。该细胞CSAp和直肠抗原３阴性；角蛋白阳性；p５３基因第２７３位密码子的G→A突变引起Arg→His替代，３０９位密码子的C→T突变导致Pro→Ser替代；细胞p５３蛋白表达水平升高；癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性；未检测到癌基因N-myc的表达；不表达Matrilysin（一种与肿瘤侵袭相关的金属蛋白酶）。
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２传代，１-２天换液一次
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁生长
【细胞培养中支原体、黑蛟虫、真菌的污染情况总结】支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。如果作为常用的抗生素的话, 建议用８ug/ml的浓度；黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率；真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。
预防细胞污染的注意事项：实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于气流的流通。实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。每次操作只处理一种细胞；即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容器打开后，倾斜45°操作，操作完成后及时盖上瓶盖。CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。
其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在３７度一般不到２min足够消化细胞(绝大部分１min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后３７度消化；什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备１００%的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液(不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开)。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的(比如Calu-３细胞)，吹打不超过２０次后(一般１０次即可)，成小规模聚集(１０个细胞左右)，是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打１h，等待单细胞悬液出现。
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