M-07e 人巨核细胞系

"M-07e 人巨核细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：淋巴母细胞样 
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。 
细胞生长：悬浮 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
M-07e 人巨核细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
贴壁细胞冻存注意事项：细胞冻存液需提前配制，不可直接将DMSO加入细胞悬液中；不同细胞消化时间有差异，以实际镜检结果为准，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，消化时间不宜过长；应选择汇合度80%-90%左右，细胞处于对数生长期时进行冻存操作，确保细胞冻存时状态，冻存密度可根据细胞特性进行调整；冻存细胞保存温度应低于-130℃，不可在-80℃长期保存。贴壁细胞冻存操作步骤：从培养箱中取出准备冻存的细胞；显微镜下观察细胞状态并拍照记录；酒精消毒培养瓶后放入安全柜中；吸去多余的培养基，加人2~3ml(PBS缓冲液)润洗一次；加入1ml胰酶，放入37℃消化；消化1min左右，在显微镜下观察细胞消化情况；消化完全后，加3ml完全培养基终止；将细胞悬液移入15ml离心管中离心，1000rpm/min（约200g）离心3-5min；吸去多余的液体，向细胞沉淀中加入适量的冻存液，轻轻吸打混匀；按比例分装至冻存管中；贴好标签后放入梯度冻存盒中；将冻存盒放入-80℃，降温过夜后，移入液氮中保存。贴壁细胞冻存实验准备事项：将15mL离心管、冻存管、PBS缓冲液、移液管、电动移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒灭菌；细胞完全培养基、0.25%胰酶-0.02%EDTA、细胞冻存液等从4℃冰箱中取出后，复温至室温，备用；程序降温盒复温至室温备用。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
M-07e 人巨核细胞系
细胞消化过程总结：其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在３７度一般不到２min足够消化细胞（绝大部分１min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后３７度消化。２，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备１００%的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液（不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开）。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的（比如Calu-３细胞），吹打不超过２０次后（一般１０次即可），成小规模聚集（１０个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打１h，等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞（润洗方法５min还不能消化），比如HCT１５, LS４１１和KM１２，这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般１００mm dish，一次最多加入５００ul，就足够了，一般我加３００ul。即使这样难消化的细胞，一般不超过５min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候，比如tsDC细胞，但也只要用少量胰酶孵育，３min左右即可看到成片沙状移动。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
GP2-293细胞系相关产品：AM38细胞、COLO320-DM细胞、NCI-H1944细胞 
SK-HEP-1细胞系相关产品：SKM-1细胞、MC3T3-E1细胞、rRMECs细胞 
GM00637H细胞系相关产品：A101D细胞、SUDHL16细胞、IM-95细胞 
NCI H226细胞系相关产品：Human Microvascular Endothelial Cell line-1细胞、HCC78细胞、BAR-T细胞 
NPC-TW 01细胞系相关产品：SK-OV-3细胞、V79-4细胞、BLO11细胞 
H-460细胞系相关产品：GLC-82细胞、RT-4细胞、B16F0细胞 
Psi2-DAP细胞系相关产品：Ca759细胞、UACC812细胞、TC-1[JHU-1]细胞 
RFL 6细胞系相关产品：BT 325细胞、HEC1-A细胞、SUM52细胞 
MOVAS细胞系相关产品：SUM159PT细胞、KHYG细胞、M-O7e细胞 
NCIH508细胞系相关产品：UACC893细胞、SUM-52PE细胞、Evsa T细胞 
H-1092细胞系相关产品：Hs 863.T细胞、MCF 10A细胞、H-1238细胞 
HEK-293-EBNA细胞系相关产品：32Dcl3细胞、Bac 1.2F5细胞、BALB/3T3 clone A31细胞 
OE33细胞系相关产品：HPMC细胞、Ramos 2G6 4C10细胞、SK Hep1细胞 
Hs_578t细胞系相关产品：NOZC-1细胞、MILE SVEN 1细胞、NCIH1876细胞 
MADB106细胞系相关产品：JEG3细胞、SUM159PT细胞、Hs604T细胞 
CCD 841 CoTr细胞系相关产品：COLO-320HSR细胞、CHP212细胞、C3H-10T1/2细胞 
CCD 841 CoTr细胞系相关产品：COLO-320HSR细胞、CHP212细胞、C3H-10T1/2细胞 
TW01细胞系相关产品：WEHI3B细胞、CCD966SK细胞、SKRC-39细胞 
MCF7-GFP细胞系相关产品：P3/NS-1细胞、SW 1353细胞、CCRF-CEM C1细胞 
IM-95细胞系相关产品：A-204细胞、AMJ2-C8细胞、JB6 Cl 30-7b细胞 
M-07e 人巨核细胞系
Hs-611-T细胞系相关产品：HCC-202细胞、H-1618细胞、Sol8细胞 
RPMI 6666细胞系相关产品：TOV-112细胞、Fetal Human Colon细胞、NCI-H1437细胞 
Jeko1细胞系相关产品：Mel-RM细胞、MMVECs细胞、ChaGo-K1细胞 
HFT 8810细胞系相关产品：CAL-85-1细胞、MPC 11细胞、HEC-151细胞 
SW1990细胞系相关产品：SNU1040细胞、CACO2细胞、C-4I细胞 
HEC-151细胞系相关产品：HepG2-luc细胞、H358细胞、T2 (174 x CEM.T2)细胞 
H508细胞系相关产品：ADR-RES细胞、U 138 MG细胞、H-1819细胞 
HIT.T15细胞系相关产品：M3 Clone M-3细胞、H7721细胞、Capan 1细胞 
T173细胞系相关产品：Hep-G2/C3A细胞、GOS3细胞、SUNE-1细胞 
OPM2细胞系相关产品：KP-N-YN细胞、SKRC 39细胞、RSC-364细胞 
HEK/EBNA细胞系相关产品：K 562细胞、HT3细胞、NCI-H1693细胞 
Tb 1 Lu (NBL-12)细胞系相关产品：VMM-5A细胞、SU-DHL-2细胞、RASMCs细胞 
Rat Chondrosarcoma Swarm细胞系相关产品：HL1细胞、HEK-293A细胞、MES 23.5细胞 
PC-3M-1E8细胞系相关产品：OVCAR-4细胞、ARH 77细胞、QBI-293A细胞 
NB1RGB细胞系相关产品：SK-MEL-2-LUC细胞、H-1819细胞、SHIN-3细胞 
CC-LP-1细胞系相关产品：HCC-2279细胞、TE-11细胞、HEC1B细胞 
SKLMS1细胞系相关产品：SCLC-21H细胞、PLA 802细胞、L5178Y TK+/-3.7.2c细胞 
SK-MES-1细胞系相关产品：NEC细胞、SU-86-86细胞、Simpson细胞 
SNU449细胞系相关产品：BNL 1MEA.7R.1细胞、NCI-H1975细胞、HUC-1细胞 
N-9细胞系相关产品：PK15细胞、MSF细胞、CG4细胞 
Immortal Pig Intestinal-2I细胞系相关产品：CHO Lec1细胞、LM TK negative细胞、Centre Antoine Lacassagne-27细胞 
COLO320DM细胞系相关产品：GC-1spg细胞、HFF细胞、HEL 92.1.7细胞 
2T细胞系相关产品：HEK-293A细胞、rUCMSCs细胞、NCM460细胞 
L(TK-)细胞系相关产品：MC57G细胞、SUNE-1细胞、RKO-AS-45-1细胞 
MUG-Chor1细胞系相关产品：Mv1.Lu细胞、L细胞、SW 1783细胞 
L-363细胞系相关产品：H2342细胞、MCF-7细胞、SK ES 01细胞 
HFL 1细胞系相关产品：MIA Paca2细胞、Panc 04.03细胞、HCC-1937细胞 
HBE135-E6E7细胞系相关产品：WERIRb1细胞、NFS 60细胞、GalK1细胞 
H-748细胞系相关产品：Mel624细胞、MARC 145细胞、SK-RC 39细胞 
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HuH6细胞系相关产品：Mel526细胞、LC1细胞、Wistar Institute, Susan Hayflick细胞 
KOPN8细胞系相关产品：HCC 94细胞、OE-19细胞、BS-C-1细胞 
UM-UC-1细胞系相关产品：FM88细胞、YT细胞、C3H/10T1/2细胞 
K7M2细胞系相关产品：GM03569D细胞、Pro-Lec1.3C细胞、NCI-H1092细胞 
Hep 2细胞系相关产品：RA细胞、HEK 293FT细胞、HOSEpiC细胞 
SK-NSH细胞系相关产品：COV-362细胞、HCC 38细胞、C4-1细胞 
NCIH2228细胞系相关产品：KCL-22细胞、FHL-124细胞、ZYM-SVEC01细胞 
H4-II-EC3细胞系相关产品：SUM-190细胞、SKRC-20细胞、T241细胞 
LMTK-细胞系相关产品：ECV细胞、MUM2B细胞、MOLM-13细胞 
HBL1细胞系相关产品：U2-OS细胞、VSMC细胞、D324细胞 
HTR-8/SVneo细胞系相关产品：DV-90细胞、hCMEC/D3细胞、PC-12细胞 
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118 MG细胞系相关产品：HNE3细胞、LK-2细胞、B16/F10细胞 
SKNBE-2细胞系相关产品：Laboratory of Allergic Diseases 2细胞、IMCD3细胞、SCL I细胞 
MESSA细胞系相关产品：M109细胞、KYSE-70细胞、L1210细胞 
OVCAR-4细胞系相关产品：WML2细胞、MBT2细胞、H-2591细胞 
CAL120细胞系相关产品：IMR90细胞、OCILY-19细胞、RK-13细胞 
RN细胞系相关产品：SCC-4细胞、4T1细胞、NCI-H1963细胞 
PGLH7细胞系相关产品：CHL-11细胞、293 EBNA细胞、OACP4C细胞 
NCI-H1417细胞系相关产品：KTCTL-140细胞、SNU-620细胞、HuT78细胞 
NCIH1563细胞系相关产品：GM03570E细胞、COLO-738细胞、TOV112D细胞 
HUT125细胞系相关产品：MLE 12细胞、NCIH660细胞、MCF7细胞 
GM02132C细胞系相关产品：HR-8348细胞、Earle's L cells细胞、PNT1/A细胞 
GM00637F细胞系相关产品：TMD-8细胞、Oka-C1细胞、Walker256-TC细胞 
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