ATN-1 人T细胞白血病细胞系

"ATN-1 人T细胞白血病细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：淋巴母细胞样 
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制好的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；６)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。 
细胞生长：悬浮 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
ATN-1 人T细胞白血病细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不好，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞建议只吹打，不消化）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
ATN-1 人T细胞白血病细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
A9(Hamprecht)细胞系相关产品：SCC-15细胞、HCC-1359细胞、PC-14细胞 
CL1-5细胞系相关产品：HuH-1细胞、HEp-2细胞、SW 626细胞 
LYR细胞系相关产品：SU-DHL6细胞、XuanWei Lung Cancer-05细胞、HSC6细胞 
McARH7777细胞系相关产品：NCIADR.RES细胞、MRCV细胞、MASMC细胞 
SN12-PM6细胞系相关产品：Panc08.13细胞、CNE-1细胞、108CC15细胞 
CCC-HHM-2细胞系相关产品：CL40细胞、NCIH2171细胞、CCD19-Lu细胞 
IMR-90细胞系相关产品：LC1细胞、WILL2细胞、MIN6细胞 
Centre Antoine Lacassagne-78细胞系相关产品：H-548细胞、LNT-229细胞、NTERA2-cloneD1细胞 
NCIH358细胞系相关产品：NOMO-1细胞、Giant Cell Tumor细胞、COS-1细胞 
SW 839细胞系相关产品：EL 4细胞、TT细胞、FU-97细胞 
H-929细胞系相关产品：C3H/10T1/2 CL8细胞、ZR751细胞、NCI-H661细胞 
alphaTC1 Clone 6细胞系相关产品：CCRF.CEM细胞、HBE135-E6E7细胞、ZR-75-1细胞 
GM03571细胞系相关产品：Fetal Rhesus Kidney-4细胞、HCC-1395细胞、SU86.86细胞 
Hs578Bst细胞系相关产品：RCC10 RGB细胞、A427细胞、EFM192C细胞 
Panc4.03细胞系相关产品：RMG-1细胞、EB2细胞、Melanoma 14细胞 
HEK-A细胞系相关产品：LTPA细胞、VAESBJ细胞、NCIH747细胞 
H-647细胞系相关产品：Kit225/K6细胞、P3X63 AG 8.653细胞、NRK49F细胞 
Panc 02细胞系相关产品：T47-D细胞、Hs675T细胞、Pan02细胞 
GM05372E细胞系相关产品：SNU423细胞、NBL-7细胞、L5178YR细胞 
NB-19细胞系相关产品：HREC细胞、PGLH7细胞、F98细胞 
ATN-1 人T细胞白血病细胞系
LU451细胞系相关产品：J82 COT细胞、NCI-H1238细胞、MRC 5细胞 
CAL-148细胞系相关产品：253J-Bladder-V细胞、T-47-D细胞、COLO680N细胞 
HLEC-B3细胞系相关产品：MOLT 16细胞、BN-CL2细胞、MTEC1细胞 
DU 4475细胞系相关产品：WRL68细胞、32D.cl3细胞、K562/ADR细胞 
BN-CL2细胞系相关产品：SW-1271细胞、OCI/AML-4细胞、Calu-3细胞 
Wayne State University-Head and Neck 13细胞系相关产品：NU-GC-4细胞、ND7/23细胞、H1792细胞 
CD-18细胞系相关产品：B16 melanoma F10细胞、NCIH1573细胞、RAEC细胞 
Rh30细胞系相关产品：HT 115细胞、Ramos.G6.C10细胞、JM-Jurkat细胞 
RL95-2细胞系相关产品：Clone 166细胞、GM03570细胞、Molm 13细胞 
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MC3T3, E1 subgroup-4 clone细胞系相关产品：Ketr-3细胞、HAPI细胞、C-6细胞 
H.Ep.-2细胞系相关产品：SNU-886细胞、PLA802细胞、BT-B细胞 
2E8细胞系相关产品：HCT 8细胞、U-87细胞、SKUT1细胞 
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JB-6 Cl 30细胞系相关产品：U-343 MG细胞、EC-109细胞、V79细胞 
Clone 15 HL-60细胞系相关产品：Hs-578Bst细胞、CW-2细胞、KU-19-19细胞 
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CT26.CL25细胞系相关产品：MDA-435细胞、H-64细胞、H2122细胞 
95-D细胞系相关产品：Line 870 Emory University-4细胞、SHP77细胞、SCI1细胞 
RAW2647细胞系相关产品：P30/OHK细胞、0V-1063细胞、SNU520细胞 
A875细胞系相关产品：SNU182细胞、U2932细胞、H820细胞 
PAMC82细胞系相关产品：mousepodocyte细胞、RIN14B细胞、Homo sapiens No. 578, tumor cells细胞 
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V79细胞系相关产品：MDCKII-WT细胞、SW-948细胞、Tokyo Medical and Dental university 8细胞 
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