Pfeiffer 人弥漫性大细胞淋巴瘤B淋巴细胞系

"Pfeiffer 人弥漫性大细胞淋巴瘤B淋巴细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：淋巴母细胞样 
细胞培养无菌操作的演示：凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用７５％酒精擦拭瓶子的外表面；靠近酒精灯火焰操作。器皿使用前必须过火灭菌，继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处，使用时仍要过火。各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：自来水刷洗，除去灰尘。烘干、泡：烤箱中烘干，然后再浸入５％稀中１２小时以除去脏物、铅、等物。刷洗、烘干：１２小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干；泡酸、清洗：用清洁液浸泡１２小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗１５次，最后蒸馏水冲洗３-５次和用双蒸水过３次。烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸(油光纸)包装。高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向１５磅时，维持２０-３０分钟。高压消毒后烘干。二、旧的玻璃器皿的洗消：刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液(酸液)，１２小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗)，再用蒸馏水冲洗３次。烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装。 
细胞生长：悬浮 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
Pfeiffer 人弥漫性大细胞淋巴瘤B淋巴细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。 
细胞传代方法：１：２传代 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：悬浮生长 
Pfeiffer 人弥漫性大细胞淋巴瘤B淋巴细胞系
因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个啊是非常考究你的功夫的！细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度啊，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理啊。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活去死的致命点。像Caco-２细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到７０%左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代。不能再拖了。关于换液传代时候洗瓶的问题。对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清１６４０去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用１６４０培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。先补充这么多，还会后续更新。再补充一点：传代时PBS洗是很重要的一步，最近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置１０-１５分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。 
细胞形态特性：淋巴母细胞样 
P3J-HR-1细胞系相关产品：HFF1细胞、HIEC6细胞、MCF7-GFP细胞 
GM03569B细胞系相关产品：NCI-H1819细胞、HCC1588细胞、MOLT 3细胞 
COLO 320 DM细胞系相关产品：HT 1197.T细胞、WPMY1细胞、SK-MEL-2-LUC细胞 
BNL.CL2细胞系相关产品：TFK-1细胞、MA-104细胞、NCIH244细胞 
SUM-52PE细胞系相关产品：GM01232E细胞、LLC-PK1细胞、U-226AR1细胞 
SV40-MES13细胞系相关产品：KRC Y细胞、G519细胞、149 PT细胞 
P560细胞系相关产品：HuT-78细胞、H889细胞、OVCAR-10细胞 
U-373 MG细胞系相关产品：L-132细胞、Huh7.5.1细胞、GS9L细胞 
H711细胞系相关产品：IMCD-3细胞、SW 982细胞、MGHU3细胞 
MESSA细胞系相关产品：M109细胞、KYSE-70细胞、L1210细胞 
RPMI7666细胞系相关产品：MFD-1细胞、EFM192C细胞、Panc_05_04细胞 
Hu-P-T3细胞系相关产品：OCM1细胞、NCI-H28细胞、526mel细胞 
H716细胞系相关产品：Colo16细胞、BRL 3A细胞、NCI-H1666细胞 
OVCAR-4细胞系相关产品：WML2细胞、MBT2细胞、H-2591细胞 
RAW-264.7细胞系相关产品：HCC1937细胞、G361细胞、NCIH2029细胞 
SUIT2细胞系相关产品：rRMECs细胞、PG-4(S+L-)细胞、CHO Lec1细胞 
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SK-N-AS细胞系相关产品：FDCP-1细胞、NCI N87细胞、CCRF细胞 
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-2细胞系相关产品：Hep-3B细胞、KM12 SM细胞、HEK293E细胞 
HBL1细胞系相关产品：U2-OS细胞、VSMC细胞、D324细胞 
Pfeiffer 人弥漫性大细胞淋巴瘤B淋巴细胞系
Molm 14细胞系相关产品：M-O7e细胞、HCO细胞、38C-13细胞 
NCI H295R细胞系相关产品：NCI-H1092细胞、RERFLCMS细胞、SUIT2细胞 
L5178Y细胞系相关产品：Transformed Human Liver Epithelial-3细胞、J774.A1细胞、PL-5细胞 
D6P2T细胞系相关产品：HFL1细胞、SAS细胞、Hs 675.T细胞 
MDST8细胞系相关产品：NCIH2286细胞、A-704细胞、MBdSMC细胞 
Normal Rat Kidney-49F细胞系相关产品：A-172MG细胞、Tu177细胞、HCC-1419细胞 
EFO 27细胞系相关产品：TU 686细胞、Kit-225细胞、JB6 [Mouse]细胞 
Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1细胞系相关产品：NCI-H-69细胞、WI38细胞、H-292细胞 
SW 954细胞系相关产品：A375-S2细胞、Mel526细胞、SUIT 2细胞 
T-98细胞系相关产品：SKml2细胞、MKN-28细胞、MDCK Type II细胞 
Roswell Park Memorial Institute 8402细胞系相关产品：Centre Antoine Lacassagne-39细胞、NCI-H378细胞、CAL-33细胞 
WTRL1细胞系相关产品：AAV-293细胞、H-920细胞、DanG细胞 
WM266-4细胞系相关产品：MeT 5A细胞、OUMS23细胞、SGC7901细胞 
G-402细胞系相关产品：FU-MMT-1细胞、NCI-H2141细胞、MGH-U1 (EJ)细胞 
BT-549细胞系相关产品：H719细胞、Karpas-422细胞、Dami细胞 
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Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-4细胞系相关产品：MDA-MB361细胞、SW-837细胞、Cloudman M3细胞 
COR-L105细胞系相关产品：HSC1细胞、NCIH1435细胞、Tca-8113细胞 
BT 20细胞系相关产品：NCI-HUT-460细胞、NE-4C细胞、NCI-H2122细胞 
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BE(2)M-17细胞系相关产品：P3X63 AG8-653细胞、GM00637B细胞、50.B1细胞 
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PC 61细胞系相关产品：CCF-STTG1细胞、Huh-7细胞、H-524细胞 
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H1581细胞系相关产品：HSC-6细胞、L 132细胞、SPDC-CCL141细胞 
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C3H10T1-2细胞系相关产品：V79-1细胞、BT 325细胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-5细胞 
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HCT 116细胞系相关产品：H1694细胞、MOLT-16细胞、Metastatic Variant-522细胞 
HBE细胞系相关产品：NCI-446细胞、RL细胞、mIMCD3细胞 
CATH.a细胞系相关产品：ECC 12细胞、NCIADRRES细胞、SUP-M2细胞 
MCF-7ADR细胞系相关产品：Walker-Ca.256细胞、KASUMI1细胞、EJ 138细胞 
KOPN8细胞系相关产品：HCC 94细胞、OE-19细胞、BS-C-1细胞 
L-M(TK-)细胞系相关产品：GB-1细胞、BALB/3T3细胞、KMM1细胞 
SK-BR-3细胞系相关产品：KMS11细胞、CAMA-1细胞、OVCAR 432细胞 
JB6Cl30细胞系相关产品：MLO-Y4细胞、H661细胞、DHL4细胞 
Madison 109细胞系相关产品：NCI-BL2141细胞、SK RC 52细胞、H510细胞 
PC3M-IE8细胞系相关产品：NWA细胞、SVEC4-10细胞、CCD-841-CoTr细胞 
FOXNY细胞系相关产品：B16/F1细胞、HMC3细胞、B16-F10--RED细胞 
COLO 320 DM细胞系相关产品：HT 1197.T细胞、2B4-L细胞、MDA 231-LM2-4175细胞 
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