NCI-H64 人肺癌细胞系

"NCI-H64 人肺癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制好的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；６)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
NCI-H64 人肺癌细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
NCI-H64 人肺癌细胞系
细胞的冻存：目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。主要操作步骤为：(１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为３×１０(６)～１×１０(７)/mL之间。(３)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装１～１.５mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(４)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入４℃冰箱中２～３小时，再移至冰箱冷冻室内３～４小时，再吊入液氮容器颈气态部分存放２小时，最后沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
SKNEP细胞系相关产品：U-138MG细胞、U14细胞、BIC1细胞 
HBZY-1细胞系相关产品：OCI-AML-3细胞、HSC1细胞、P-388细胞 
H-526细胞系相关产品：HMEC-1细胞、GM05384细胞、Mono-Mac-1细胞 
HEY A8细胞系相关产品：ME-180细胞、H-2198细胞、CMK细胞 
CCRF CEM细胞系相关产品：ARO81-1细胞、MKN 7细胞、2PK-3细胞 
PC3细胞系相关产品：MDCK-2细胞、NCI-H1770细胞、NUGC3细胞 
NCIH1651细胞系相关产品：KG-1细胞、HuT 78细胞、NCIH1792细胞 
HT115细胞系相关产品：OCI-AML-5细胞、SNU5细胞、SKMEL3细胞 
LM2-4175细胞系相关产品：Spodoptera frugiperda clone 9细胞、MHCC97细胞、T-98G细胞 
Hopkins-92细胞系相关产品：SKBr3细胞、H1650细胞、Panc 4.03细胞 
NeHepLxHT细胞系相关产品：SNU-C2A细胞、SLMT1细胞、SNU449细胞 
PC14细胞系相关产品：LMTK-细胞、Sup T-1细胞、HOPC细胞 
Baby Hamster Kidney 21细胞系相关产品：H2087细胞、DHBE细胞、H520细胞 
MN 60细胞系相关产品：NCI-H719细胞、639-V细胞、MZCRC1细胞 
Fortner's melanotic melanoma #3细胞系相关产品：C4I细胞、AR4-IP细胞、NCI-H2347细胞 
HEY-A8细胞系相关产品：H1395细胞、SNU520细胞、CHO cell clone K1细胞 
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HCC15细胞系相关产品：FRO81-2细胞、YD-38细胞、MOLT.4细胞 
MH-22a细胞系相关产品：High-5细胞、NCI-H2286细胞、P3-NS1/1Ag 4.1细胞 
ARO细胞系相关产品：2PK3细胞、MOLM-14细胞、A375.S2细胞 
NCI-H64 人肺癌细胞系
H69/P细胞系相关产品：Mo 59J细胞、SNU-1040细胞、HFT-8810细胞 
Lewis lung carcinoma line 1细胞系相关产品：MDA157细胞、IPEC-1细胞、SNU119细胞 
Fukuoka University-Malignant mixed Mullerian Tumor-1细胞系相关产品：Hs600T细胞、NCI-SNU-182细胞、NRK clone 52E细胞 
OAW 42细胞系相关产品：RMG-I细胞、ME-180细胞、RPMI no 8226细胞 
SK-N-BE细胞系相关产品：ROS 17/2.8细胞、CCD841CoN细胞、KYSE-410细胞 
ssMCF-7细胞系相关产品：NCI-SNU-C1细胞、NCI.H522细胞、AZ 521细胞 
Hep 3B2细胞系相关产品：JKT-1细胞、CCD-841-CoN细胞、769-P细胞 
BEL-7402细胞系相关产品：5-8F细胞、P-36细胞、Epithelioma Papulosum Cyprini细胞 
Human Hepatocyte Line 5细胞系相关产品：COLO206F细胞、NB.4细胞、Huh7.5细胞 
MSTO-211H细胞系相关产品：H-748细胞、Bx-PC3细胞、ECGI10细胞 
MCF-10 Attached细胞系相关产品：NCIH929细胞、E6-1细胞、RL952细胞 
Hepatoma-22细胞系相关产品：NCI.H522细胞、Colo320细胞、B-104细胞 
U251细胞系相关产品：Human Lung Microvascular Endothelial Cell line-5a细胞、H-2444细胞、B16-F10-BL6细胞 
MFE-296细胞系相关产品：PIG1细胞、H-747细胞、A375mel细胞 
JOSK-M细胞系相关产品：SKNO-1细胞、Colo699细胞、HcaF细胞 
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FLS细胞系相关产品：Hs68细胞、PC10细胞、SNU484细胞 
LK 2细胞系相关产品：MZ-CRC-1细胞、LADMAC细胞、J774 A1细胞 
COV 504细胞系相关产品：HGBEC细胞、NCI-H520细胞、L-132细胞 
P 3 HR 1细胞系相关产品：SK-MEL-31细胞、Monomac-1细胞、NCI-HUT-460细胞 
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BrCL12细胞系相关产品：LM2-4175细胞、HM06.A1细胞、EOL1细胞 
ZR75-1细胞系相关产品：MSB-1细胞、SF126细胞、Large Cell Lung Cancer-103H细胞 
NK-92MI细胞系相关产品：SLMT1细胞、SUPB-15细胞、NCI-SNU-407细胞 
KM-H2细胞系相关产品：HMC-1细胞、CaSki细胞、KP-2细胞 
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HITT15细胞系相关产品：CNE-1细胞、Lu-65细胞、HR-1细胞 
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Mv 1 Lu (NBL-7)细胞系相关产品：BCaP 37细胞、H-1944细胞、NCI-UMC-11细胞 
CCD18Co细胞系相关产品：HLE B-3细胞、NCI-H1385细胞、HBL 100细胞 
LS-411N细胞系相关产品：N-87细胞、H1648细胞、MESSA细胞 
NCIH2023细胞系相关产品：CHP 100细胞、COLO 206细胞、Glioma-261细胞 
2PK-3细胞系相关产品：OC-3-VGH细胞、MLA 144细胞、A 2780 CP细胞 
WM451Lu细胞系相关产品：HS 1.Tes细胞、U-138 MG细胞、NK10a细胞 
GM05372E细胞系相关产品：SNU423细胞、NBL-7细胞、L5178YR细胞 
UO-31细胞系相关产品：Human Kidney-2细胞、PC2细胞、MC-3T3细胞 
SK-NMC细胞系相关产品：Swiss 3T6细胞、PAI细胞、MAEC细胞 
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A2780/Taxol细胞系相关产品：RT112细胞、OVMANA细胞、HSC/mHSC细胞 
KMS-18细胞系相关产品：MALME.3M细胞、TCam 2细胞、HH [Human lymphoma]细胞 
MKN-28细胞系相关产品：H820细胞、Japanese Tissue Culture-39细胞、HTh 74细胞 
IEC-18细胞系相关产品：McA-RH7777细胞、CTV1细胞、Kit 225细胞 
H-929细胞系相关产品：C3H/10T1/2 CL8细胞、ZR751细胞、NCI-H661细胞 
University of Arizona Cell Culture-812细胞系相关产品：WEHI 231细胞、HCC-1143细胞、NCIH460细胞 
B 95.8细胞系相关产品：NS20Y细胞、KBM5细胞、HFE-145细胞 
KMST6细胞系相关产品：MH7A细胞、SUM102PT细胞、NB19-RIKEN细胞 
H-1048细胞系相关产品：3T3-442A细胞、C 6细胞、OC316细胞 
TE-671细胞系相关产品：LM8细胞、TGW-I-nu细胞、BC-025细胞 
NTERA-2cl.D1细胞系相关产品：DHBE细胞、PL 5细胞、RGC6细胞 
H-524细胞系相关产品：SRA01/04细胞、G361-mel细胞、OCI AML5细胞 
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