OKa-C-1 人低分化肺癌鳞癌细胞系

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细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制好的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；６)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
OKa-C-1 人低分化肺癌鳞癌细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
冻存和复苏的原则：慢冻快融》当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序：采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时，1~2℃/min；当温度达-25℃以下时，5~10℃/min；当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中。2.简易程序：将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1~2℃的速度，在40min内降至液氮表面过夜，次晨投人液氮中。3.传统程序：冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时（或隔夜）→液氮槽长期储存。细胞冻存方法：1.预先配制冻存液》（1）8%DMSO+细胞生长液（92%血清）2.取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×10(6)~5×10(6)细胞/ml）。3.加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法：1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1分钟内全部融化（不要超过3分钟）。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养，24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液，以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
OKa-C-1 人低分化肺癌鳞癌细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
PC-3M IE8细胞系相关产品：Vertebral Cancer of the Prostate细胞、MRC-V细胞、AML-12细胞 
HEL-299细胞系相关产品：EoL-1细胞、TE3A细胞、NCIH810细胞 
Hca-F细胞系相关产品：ARO81细胞、RASMCs细胞、SK Mel 2细胞 
SW-954细胞系相关产品：HB 611细胞、KG1细胞、PC 12细胞 
COLO320DM细胞系相关产品：GC-1spg细胞、HFF细胞、HEL 92.1.7细胞 
MDCC MSB1细胞系相关产品：MLA-144细胞、DoTc2-4510细胞、Porcine Kidney-13细胞 
Centre Antoine Lacassagne-12T细胞系相关产品：MDA MB 134VI细胞、HOS细胞、Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B细胞 
LADMAC细胞系相关产品：TO175T细胞、MRC 5细胞、FHCRC subclone 11细胞 
UCLA-RO 81细胞系相关产品：M-14细胞、HTori:3细胞、MDA.MB.231细胞 
VK2/E6E7细胞系相关产品：ESC细胞、H660细胞、C17细胞 
CFPAC1细胞系相关产品：PJ34细胞、143B TK-细胞、G-402细胞 
Molm 14细胞系相关产品：M-O7e细胞、HCO细胞、38C-13细胞 
TB1 Lu细胞系相关产品：SK_HEP1细胞、P3HR-1细胞、LA-N-1细胞 
DR2R1610细胞系相关产品：253J细胞、50.B1细胞、Tregs细胞 
Anip973细胞系相关产品：WI-38细胞、COLO-320-DM细胞、MDCKII细胞 
SW-954细胞系相关产品：HB 611细胞、KG1细胞、PC 12细胞 
SW620细胞系相关产品：Granta 519细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-436细胞、Vero-76细胞 
WI-38细胞系相关产品：RD细胞、LMTK-细胞、OCI-AML3细胞 
MRC 5细胞系相关产品：BE2-C细胞、PE CA PJ34细胞、RC-4B细胞 
SCC 4细胞系相关产品：JTC-39细胞、RSC96细胞、Z-138细胞 
OKa-C-1 人低分化肺癌鳞癌细胞系
CTV-1细胞系相关产品：P3/NS1/Ag4-1细胞、T-98G细胞、FLS细胞 
Mono Mac 1细胞系相关产品：BHP-10细胞、KE 37细胞、Leukemia 1210细胞 
Hepatoma-22细胞系相关产品：NCI.H522细胞、Colo320细胞、B-104细胞 
NTERA2细胞系相关产品：NBL-4细胞、NK-92 MI细胞、SW 1353细胞 
NCI-H660细胞系相关产品：SK-MEL5细胞、GM03573细胞、LS 1034细胞 
SUM-102PT细胞系相关产品：MZCRC1细胞、UWB1289细胞、D283细胞 
Natural Killer-92细胞系相关产品：BrCL15细胞、BEL7405细胞、H-865细胞 
CCC-HHM-2细胞系相关产品：CL40细胞、NCIH2171细胞、CCD19-Lu细胞 
SNU119细胞系相关产品：MDA1386细胞、MUTZ-3细胞、CL1-0细胞 
Colon38细胞系相关产品：H125细胞、RC13细胞、JF305细胞 
HUT 125细胞系相关产品：LTEP a2细胞、TPC1细胞、SW260细胞 
RA.1细胞系相关产品：TT细胞、H-1092细胞、COLO 680N细胞 
KMS18细胞系相关产品：NS20-Y细胞、UCLA NPA-87-1细胞、JHH-7细胞 
A431/P细胞系相关产品：NCIH2135细胞、MCF12F细胞、LMTK-细胞 
H-1694细胞系相关产品：HEL 92.1.7细胞、526-mel细胞、SKMEL-2细胞 
WEHI 3细胞系相关产品：NCI-H292细胞、Hs27F细胞、Clone 15 HL-60细胞 
32D clone3细胞系相关产品：A9细胞、4T1-A细胞、PANC-02-03细胞 
B-cell with DC Morphology细胞系相关产品：SCL2细胞、Caco-2/ATCC细胞、CA46细胞 
Kelly细胞系相关产品：OSC19细胞、CHL-IU细胞、CCD-1095Sk细胞 
2V6.11细胞系相关产品：IPLB-Sf21AE细胞、NCIH1299细胞、WC00044细胞 
NEC8细胞系相关产品：EB3 [Human Burkitt lymphoma]细胞、Rca-B细胞、KYSE410细胞 
CAL 85-1细胞系相关产品：Intestinal Epithelioid Cell line No. 18细胞、HIBEpiC细胞、SCC-7细胞 
MDA-415细胞系相关产品：HUVEC细胞、Mouse INsulinoma 6细胞、C22 (Clara)细胞 
HEC1-B细胞系相关产品：HConEpic细胞、HT 1376.T细胞、GDM-1细胞 
MB231细胞系相关产品：MKN 45细胞、KNS-81细胞、NRK 49F细胞 
SKMEL2细胞系相关产品：Tca-83细胞、SW1353细胞、GM04679细胞 
SNU-354细胞系相关产品：SK RC 20细胞、Ketr-3细胞、NCTC-1469细胞 
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NCI-H676细胞系相关产品：SKN-SH细胞、OCILY-3细胞、BC-027细胞 
Mouse podocyte细胞系相关产品：PANC 813细胞、MEC-1细胞、L5178Y-R细胞 
Hepa1-6细胞系相关产品：Dx5细胞、CATH-a细胞、SAS细胞 
CATHa细胞系相关产品：KMB17细胞、GM 637细胞、GM 637细胞 
PC3M细胞系相关产品：BMSC/hBMSCs细胞、KM12SM细胞、PNT-1A细胞 
SNU251细胞系相关产品：LS 513细胞、L-Wnt-3A细胞、AN3-CA细胞 
MDCK (NBL-2)细胞系相关产品：KMS-26细胞、As-PC1细胞、NCI-H69C细胞 
EVSAT细胞系相关产品：MB49细胞、HCC0044细胞、PVEC细胞 
X63Ag8-653细胞系相关产品：HCMEC(BL12-H)细胞、HCCLM3细胞、GNM细胞 
BHK21细胞系相关产品：MHCC97细胞、H2135细胞、SU 86.86细胞 
KBM5细胞系相关产品：KMM-1细胞、Virginia Mason Research Center-Renal Cancer Z细胞、NW38细胞 
P3JHR-1细胞系相关产品：SV40-MES13细胞、NCI-H920细胞、SKNBE细胞 
Centre Antoine Lacassagne-62细胞系相关产品：MESSA细胞、IHC-ST1细胞、CEM-CCRF (CAMR)细胞 
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Bac1 2F5细胞系相关产品：X63Ag8.653细胞、PanC1细胞、Hu-P-T4细胞 
KM-12细胞系相关产品：T8细胞、MZCRC1细胞、U-251 MG细胞 
WSUDLCL2细胞系相关产品：CCC-HPF-1细胞、TE 32细胞、LAN5细胞 
H2330细胞系相关产品：MeT-5A细胞、OEC19细胞、hTERTHME1细胞 
Capan1细胞系相关产品：SK-RC-20细胞、UWB1-289细胞、HRMC细胞 
Emory University-2细胞系相关产品：ME 180细胞、MDA-MB-157细胞、HIT clone T15细胞 
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Chinese Hamster Ovary细胞系相关产品：Hs934T细胞、SKBR-3细胞、MGC-803细胞 
BNL.1ME A.7R.1细胞系相关产品：NCI-H740细胞、NCI-SNU-C1细胞、3T3-Swiss albino细胞 
B16-F10-BL6细胞系相关产品：OVCAR.4细胞、WB-F344细胞、ATC241细胞 
SK-ES1细胞系相关产品：HS-5细胞、GM2132细胞、SU-DHL-5细胞 
HCAEC细胞系相关产品：NCIH522细胞、BALB 3T3 clone A31细胞、Wien133细胞 
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