BT-474 人乳腺导管瘤细胞系

"BT-474 人乳腺导管瘤细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
常见培养细胞预防污染的有效措施：体外培养的细胞受到严重污染时，有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此，防止污染，预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终，才能将发生污染的可能性降到最小程度。一般预防可从以下几方面着手：１)添加抗生素：各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好(但迄今尚无对抗支原体特效抗生素)。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性，且对细胞本身也有一定影响，因此为避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统中的抗生素，或尽可能不用抗生素处理；２)从物品、用品消毒灭菌着手：细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时，在无菌过滤操作中，随着滤过体积的增大，滤膜破损的可能性增加，故应选择最后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作：７５%的酒精搽拭培养箱后，使用可移动的紫外灯至少消毒３０min，加入高压灭菌过的超纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制３００ml的饱和酸铜加３L灭菌超纯水混合成酸铜溶液加入水槽中。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
BT-474 人乳腺导管瘤细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气的，大家争取做到因材施教，比如试试下面的“四步消化法”。（以难消化细胞为例），具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍（目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉）。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况把握）。 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分 
BT-474 人乳腺导管瘤细胞系
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为３００xg(约１,０００rpm)，５-１０分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含５-１０%DMSO(dimethyl sulfoxide)和９０-９５%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于４°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于４°C ３０~６０分钟→ (-２０°C ３０分钟)→-８０°C １６~１８小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降１-３°C至–８０°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-２０°C不可超过１小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-８０°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为１x１０(６)cells/ml vial，融合瘤细胞则以５x１０(６)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
Ketr3细胞系相关产品：HRA19细胞、VE细胞、RPMI7666细胞 
Shadyside Hospital Pittsburgh-77细胞系相关产品：H9c2 (2-1)细胞、R1800[RA]细胞、M059K细胞 
Buffalo Rat Liver-3A细胞系相关产品：VMRCLCD细胞、Hs940.T细胞、Verda reno细胞 
Sup T-1细胞系相关产品：NTERA-2 cl.D1细胞、MC116细胞、SK-MEL-MeWo细胞 
MOLP8细胞系相关产品：D341MD细胞、LX-2细胞、McCoy B细胞 
LS 174T细胞系相关产品：HS 445T细胞、P3-NS1/1-Ag4-1细胞、L 540细胞 
NKL细胞系相关产品：Kobe university Oral Squamous Cell culture-2细胞、C4-2 B细胞、SW 1222细胞 
MDA MB 361细胞系相关产品：H3255_DA细胞、Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1细胞、HFF-1细胞 
BT20细胞系相关产品：OV-90细胞、MDAMB361细胞、PANC-04-03细胞 
Panc-02细胞系相关产品：UM-UC3细胞、LC-2 ad细胞、MARC-145细胞 
PA1细胞系相关产品：Nb2a细胞、EJ-1细胞、K-562细胞 
NKM-1细胞系相关产品：ZYM-SVEC01细胞、SCL-1细胞、Roswell Park Memorial Institute 1788细胞 
Scott and White No. 13细胞系相关产品：NCI-H735细胞、MCF-7ADR细胞、NCIH740细胞 
B104 [Rat neuroblastoma]细胞系相关产品：C57/B6-L细胞、HHL5细胞、C166细胞 
SNK1细胞系相关产品：H1882细胞、NCI-H847细胞、Human Hepatocyte Line 5细胞 
HT(H9)细胞系相关产品：Jurkat E6-1细胞、PLA-801C细胞、CG-4细胞 
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Kasumi 1细胞系相关产品：Nb2-11细胞、PC.3细胞、SK_N_FI细胞 
LS-174细胞系相关产品：OLN-93细胞、NCI-H1703细胞、HCC-2279细胞 
KM H-2细胞系相关产品：NCI-H1838细胞、Kit 225细胞、AZ521细胞 
BT-474 人乳腺导管瘤细胞系
KY70细胞系相关产品：MC3T3-E1 Subclone 4细胞、SNU398细胞、Malme-3M细胞 
OCILY3细胞系相关产品：Madison细胞、mouse Inner Medullary Collecting Duct-3细胞、HEK AD293细胞 
Hos TE-85细胞系相关产品：MS1细胞、H650细胞、ACC3细胞 
BCECs细胞系相关产品：PANC403细胞、MCF-7/ADR-RES细胞、MDA-MB 468细胞 
RCC 7860细胞系相关产品：COLO-205细胞、WEHI231细胞、CAKI 2细胞 
CAL 12T细胞系相关产品：HOS-TE85细胞、SW-1990细胞、MES-SA/Dx-5细胞 
Sp2/0-Ag14细胞系相关产品：SUDHL5细胞、OCI-Ly 8细胞、CEMO-1细胞 
HANK1细胞系相关产品：MCA-38细胞、H-1781细胞、NCI-H322细胞 
C41细胞系相关产品：HEK293-A细胞、C2A细胞、EMT6细胞 
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D-283MED细胞系相关产品：293 Ad5细胞、KMS-18细胞、P3-NS1/1-Ag4-1细胞 
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DoTc2-4510细胞系相关产品：MS-751细胞、RPMI no. 8226细胞、SG231细胞 
ST2细胞系相关产品：R D细胞、RS4:11细胞、Hs675细胞 
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KNS-62细胞系相关产品：UMNSAH-DF-1细胞、SK-N-BE(2)细胞、MNNG/HOS细胞 
LK 2细胞系相关产品：MZ-CRC-1细胞、LADMAC细胞、J774 A1细胞 
Factor Dependent Cell-Paterson 1细胞系相关产品：HeLa S-3细胞、RPMI-8402细胞、G-Olig2细胞 
CCD-841CoN细胞系相关产品：HPF细胞、Tsup-1细胞、hTERT-RPE细胞 
Michigan Cancer Foundation-7细胞系相关产品：WM-239细胞、Hs 888Lu细胞、SW-13细胞 
SKNBE2C细胞系相关产品：C17细胞、ECV细胞、JiyoyeP-2003细胞 
Hs729细胞系相关产品：Panc 08.13细胞、HONE1细胞、MC3T3-E细胞 
HCC-2279细胞系相关产品：HPAEC细胞、UMRC2细胞、UO31细胞 
NCI-H2228细胞系相关产品：HEM细胞、CaES-17细胞、Jiyoye(P-2003)细胞 
DSL6A/C1细胞系相关产品：HSC-4细胞、SW 900细胞、LK-2细胞 
RIN-m5F细胞系相关产品：NCIN87细胞、CCC-HHM-2细胞、639V细胞 
MyLa 2059细胞系相关产品：B16 melanoma细胞、KYSE 520细胞、mRTEC细胞 
NCI-H128细胞系相关产品：UO.31细胞、YTMLC-90细胞、GM03573A细胞 
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PF382细胞系相关产品：FRTL-5 Cl 2细胞、RWPE1细胞、PC 61 5.3细胞 
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Michigan Cancer Foundation-7细胞系相关产品：WM-239细胞、Hs 888Lu细胞、SW-13细胞 
Vero 76 clone E6细胞系相关产品：EFO 27细胞、HMCB细胞、PaTu-8988s细胞 
beta-TC6细胞系相关产品：BCPAP细胞、TE3细胞、Normal Rat Kidney-52E细胞 
HOS-MNNG细胞系相关产品：GB1细胞、HUC细胞、H187细胞 
J82COT细胞系相关产品：SK MES 1细胞、P3-X63-Ag 8.653细胞、SJCRH30细胞 
HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]细胞系相关产品：Y3M细胞、HPAF2细胞、MLM细胞 
NCI-SNU-449细胞系相关产品：MDA-MB-330细胞、OE21细胞、BALB/3T3 cl. A31细胞 
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Buffalo Rat Liver-3A细胞系相关产品：VMRCLCD细胞、251 MG细胞、IGROV 1细胞 
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