GES-1 人胃黏膜上皮细胞系

"GES-1 人胃黏膜上皮细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍 
细胞形态：上皮细胞样 
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：１)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为１*１０(６)至１*１０(７)细胞/毫升；２)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷冻的培养物，保存时间为１-５天，但这不是保存的方法。在３７℃充分解冻后应立即开始培养；３)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在２４小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期；４)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻最近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。 
细胞生长：贴壁 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
GES-1 人胃黏膜上皮细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
细胞培养时分布不均匀，通常操作步骤：做细胞生物学实验，细胞铺板大概是我们最常见的一个实验。但有时候铺得不是很均匀：要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。下面为大家分享几点经验。尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶润洗一遍（25cm2培养瓶或6孔板），弃掉胰酶，37度消化2-3分钟或室温消化5min左右，镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够，延长消化时间。96孔板一般以100微升每孔接种，直接用100微升移液器吸取细胞悬液，沿孔壁（稍离开一点孔底即可，不要离底太高）直接接入，移液器不需完全打到，轻轻按下即可，每铺完一行换一次枪头同时轻轻混匀细胞悬液。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置约5分钟，放入37度培养箱。6孔板、12孔板或24孔板，可采用将每个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底，然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底，其它孔依此类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢，但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式，但力度没有96孔板好掌握，效果没有96孔板好。培养瓶里面加好细胞以后(比如传代好/分好细胞以后)，先顺时针摇晃3次，马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。 
细胞传代方法：１：２传代 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：贴壁生长 
GES-1 人胃黏膜上皮细胞系
我常看到一个比较复杂的四步消化法，这个挺有意思，我也是次听说，应该是网友自己发展出来的方法，很有参考价值。但我估计这个方法可能对付少数非常怪异的细胞才需要这么复杂的程序。我目前养过的近３００株细胞里面，还没遇到这么怪异的。比如Caco２其实是很好消化的细胞，不需要胰酶孵育即可，只是有点成片分布。不要以为成片分布是自己没养好，这个视细胞而定。如果和标准形态不一致，那可能是自己没消化好导致的，但如果消化方法正确，仍然成片分布，甚至完全吹打成单细胞悬液，贴壁后仍然成片分布，这是细胞的特性，是因为贴壁过程中重新聚集了。这个时候你拼了命要去让它均匀分布，你的细胞之后会对你越来越不好；比较难消化的细胞(润洗方法５min还不能消化)，就以colon cancer为例，比如HCT１５, LS４１１和KM１２，这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般１００ mm dish，一次最多加入５００ul，就足够了，一般我加３００ul。即使这样难消化的细胞，一般不超过５min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候，比如tsDC细胞，但也只要用少量胰酶孵育，３min左右即可看到成片沙状移动。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
CMT-167细胞系相关产品：SCLC21H细胞、Hs-578-T细胞、SU8686细胞 
OCI-LY-1细胞系相关产品：Hs 445细胞、L6细胞、SMMC7721细胞 
KM933细胞系相关产品：Psi-2 DAP细胞、SK-Mel1细胞、BT549细胞 
GES-1细胞系相关产品：HCET细胞、PC-14细胞、GI-1细胞 
MD Anderson-Metastatic Breast-361细胞系相关产品：OCILY10细胞、RCC23细胞、CRFK细胞 
VAESBJ细胞系相关产品：ELD-1细胞、NCI-H322T细胞、MyLa2059细胞 
Hs27细胞系相关产品：K299细胞、OS-732细胞、HCC-44细胞 
KATOIII细胞系相关产品：NCI-841细胞、Z310细胞、NIH:OVCAR-4细胞 
NCIH2591细胞系相关产品：KS-SLK细胞、Mouse Colon 38细胞、Meat Animal Research Center-145细胞 
LA795细胞系相关产品：Vero from pool #76细胞、HLF-a细胞、OVCAR-5细胞 
B/C3T3细胞系相关产品：NCI-H1672细胞、HMC细胞、HNE3细胞 
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RT4细胞系相关产品：U-118-MG细胞、OLN 93细胞、SVOG细胞 
PaTu 8988s细胞系相关产品：22Rv1细胞、HK2细胞、NCTC 929细胞 
COV362细胞系相关产品：SKMEL-1细胞、L5178YR细胞、P30 OHK细胞 
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GES-1 人胃黏膜上皮细胞系
MDAMB175VII细胞系相关产品：HCV-29细胞、CT-26细胞、WM451细胞 
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S-16细胞系相关产品：Hs578Bst细胞、Vero 76 clone E-6细胞、QGY 7701细胞 
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NCIH1355细胞系相关产品：HMSC细胞、D341细胞、T. T细胞 
Madin Darby Bovine Kidney细胞系相关产品：LU65细胞、JB6 [Mouse]细胞、H1623细胞 
GES-1 人胃黏膜上皮细胞系
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DoHH2细胞系相关产品：VMRCRCZ细胞、H727细胞、HCC1359细胞 
ARO81-1细胞系相关产品：IBRS2细胞、COLO 738细胞、T-98细胞 
KM932细胞系相关产品：T-24细胞、HUTU80细胞、SHG-44细胞 
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