"NCI-H661 Adherent人大细胞肺癌细胞系
细胞背景资料：该细胞１９８２年建系，源自一位患有大细胞肺癌的男性的胸腔积液。该细胞角蛋白、波形蛋白阳性。
细胞形态：上皮细胞样
细胞培养过程中，总是会出现各种意想不到的问题，一不留神就会全盘皆输。所谓细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。下面是贴壁细胞的保藏方法，希望对细胞培养初学操作者有所帮助：1)观察细胞状态：贴壁细胞密度达到85-90%，即可以细胞冻存形式进行保藏，拍照，记录细胞状态；2)细胞清洗：培养皿表面消毒后，转移至生物安全柜中，去除培养皿中培养液，加入12mlPBS，轻轻摇晃培养皿清洗细胞，随后吸除PBS清洗液；3)细胞消化：将2ml胰酶加入培养皿中，完全覆盖细胞，置于显微镜下观察（期间禁止摇晃培养皿），当细胞刚开始脱落时，立即转移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余约0.5ml胰酶，转移至培养箱内继续消化，每30秒肉眼观察细胞状态，至细胞成流沙状完全脱落，转移至生物安全柜中，加入12ml完全培养基，终止消化；4)细胞离心：将终止消化后的细胞悬液吹打均匀，吸取至15ml离心管中，1000r/min（110g），离心3min；5)细胞冻存：离心后去除细胞上清液，按照冻存细胞量5*10^5/ml，吸取冻存液重悬细胞沉淀，吹打均匀后分装至相应的冻存管中，进行冻存；6)细胞保藏：冻存管做好标记，放至程序降温盒中，于4℃冰箱放置30min，转移至-80℃超低温冰箱过夜，将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
NCI-H661 Adherent人大细胞肺癌细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
常规的细胞实验(增殖，凋亡，迁移，分化之类的)，受消化影响不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话(难消化细胞例外)。但少数实验，比如病毒包装，对细胞代数，对细胞状态要求极高。这个时候，胰酶消化，就是润洗，都会对细胞包装病毒的能力有影响，传代次数一多，细胞包装能力就会逐渐下降(当然也有其它因素影响包装效率)。这个时候都不用胰酶消化，用一些盐溶液(不是EDTA液)即可。这些盐溶液通过影响ECM相关酶的活性，来使得细胞脱离基质附着表面，但不切割任何蛋白；EDTA的作用。许多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白，trypsin切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca离子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者对付特别难消化的细胞，添加多一些EDTA，就是这个道理。一般不要试图延长消化时间(如果１０min还消化不彻底的话)，而应该想其它办法；PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤，是常见的操作，因为Serum含有抑制trypsin的蛋白。但这里面也有学问可以讲，对于一些难消化细胞，那么可以配制不含Ca，Mg离子的PBS，因为这些离子也会抑制trypsin的活性。但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的细胞，不需要配制如此溶液。
PANC403细胞系相关产品：MFM223细胞、Hs294T细胞、H-929细胞
COLO 320DM细胞系相关产品：4T1.2细胞、R2C细胞、C3H/10T1/2 CL8细胞
MES-SA/Dx-5细胞系相关产品：RS1细胞、HEK 293T/17细胞、HSCT6细胞
细胞传代方法：１：３—１：５传代，每周换液２—３次
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
SKNAS细胞系相关产品：SNK-6细胞、Super Tube细胞、NIH:OVCAR4细胞
NR-8383细胞系相关产品：SU4细胞、NK92细胞、HFL 1细胞
Ramos细胞系相关产品：CAL51细胞、PC-9细胞、C32 mel细胞
细胞生长特性：贴壁生长
NCI-H661 Adherent人大细胞肺癌细胞系
细胞形态特性：上皮样
传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。【操作步骤】１)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液；２)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜；３)置３７℃孵箱或室温(２５℃温度)下进行消化，２~５min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化；５)使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞；６)用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO２培养箱中进行培养；７)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般２～３d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。【注意事项】１)掌握好细胞消化的时间，消化时间过短时，细胞不宜从瓶壁脱落，过长的消化会导致细胞脱落、损伤；２)掌握好消化浓度，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时细胞消化时间相对延长。
MJ细胞系相关产品：RN细胞、NCI-SNU-119细胞、Jurkat-FHCRC细胞
KMBC细胞系相关产品：MKN-28细胞、TE 85 ClF-5细胞、Neukoplast细胞
C-28/I2细胞系相关产品：C-32细胞、L-5178-Y-R细胞、BNCL-2细胞
YD-38细胞系相关产品：H64细胞、293-FT细胞、MS 751细胞
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NCI-H661 Adherent人大细胞肺癌细胞系
MIA-Pa-Ca-2细胞系相关产品：451-LU细胞、JEG-3细胞、Panc 08.13细胞
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Walker-256细胞系相关产品：AR4-IP细胞、HCC0366细胞、HEL-92_1_7细胞
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CZ-1细胞系相关产品：ST细胞、EFO-27细胞、HMC细胞
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Mouse Colon 38细胞系相关产品：KTC1细胞、SNU-484细胞、MDA-231细胞
AN3细胞系相关产品：Kasumi 1细胞、alpha TC1 clone 6细胞、MNNG/HOS Cl #5细胞
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H446细胞系相关产品：SUIT 2细胞、OV-CA 432细胞、SF 767细胞
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