pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白)
pCMV-N-DsRed是信裕生物自行研发的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达N端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein，香菇珊瑚红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个DsRed的完整编码序列，并且在DsRed前面加入Kozak序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有DsRed标签的融合蛋白。利用DsRed的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用DsRed抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。DsRed与GFP没有序列同源性，不能使用GFP抗体检测DsRed。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-DsRed质粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
Multiple cloning site
1352-1417
T7 promoter and T7 primer binding site
1460-1482
SV40 polyA signal
1495-1877
f1 origin of ss-DNA replication
2015-2319
Neomycin/kanamycin resistance ORF
2861-3653
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3654-4111
pCMV-N-DsRed质粒(4959bp)的图谱如下：
pCMV-N-DsRed的多克隆位点的详细图谱如下：
0661
GCTACCGGTC GCCACCATGG ACAACACCGA GGACGTCATC AAGGAGTTCA
CGATGGCCAG CGGTGGTACC TGTTGTGGCT CCTGCAGTAG TTCCTCAAGT
0711
TGCAGTTCAA GGTGCGCATG GAGGGCTCCG TGAACGGCCA CTACTTCGAG
ACGTCAAGTT CCACGCGTAC CTCCCGAGGC ACTTGCCGGT GATGAAGCTC
0761
ATCGAGGGCG AGGGCGAGGG CAAGCCCTAC GAGGGCACCC AGACCGCCAA
TAGCTCCCGC TCCCGCTCCC GTTCGGGATG CTCCCGTGGG TCTGGCGGTT
0811
GCTGCAGGTG ACCAAGGGCG GCCCCCTGCC CTTCGCCTGG GACATCCTGT
CGACGTCCAC TGGTTCCCGC CGGGGGACGG GAAGCGGACC CTGTAGGACA
0861
CCCCCCAGTT CCAGTACGGC TCCAAGGCCT ACGTGAAGCA CCCCGCCGAC
GGGGGGTCAA GGTCATGCCG AGGTTCCGGA TGCACTTCGT GGGGCGGCTG
0911
ATCCCCGACT ACATGAAGCT GTCCTTCCCC GAGGGCTTCA CCTGGGAGCG
TAGGGGCTGA TGTACTTCGA CAGGAAGGGG CTCCCGAAGT GGACCCTCGC
0961
CTCCATGAAC TTCGAGGACG GCGGCGTGGT GGAGGTGCAG CAGGACTCCT
GAGGTACTTG AAGCTCCTGC CGCCGCACCA CCTCCACGTC GTCCTGAGGA
1011
CCCTGCAGGA CGGCACCTTC ATCTACAAGG TGAAGTTCAA GGGCGTGAAC
GGGACGTCCT GCCGTGGAAG TAGATGTTCC ACTTCAAGTT CCCGCACTTG
1061
TTCCCCGCCG ACGGCCCCGT AATGCAGAAG AAGACTGCCG GCTGGGAGCC
AAGGGGCGGC TGCCGGGGCA TTACGTCTTC TTCTGACGGC CGACCCTCGG
1111
CTCCACCGAG AAGCTGTACC CCCAGGACGG CGTGCTGAAG GGCGAGATCT
GAGGTGGCTC TTCGACATGG GGGTCCTGCC GCACGACTTC CCGCTCTAGA
1161
CCCACGCCCT GAAGCTGAAG GACGGCGGCC ACTACACCTG CGACTTCAAG
GGGTGCGGGA CTTCGACTTC CTGCCGCCGG TGATGTGGAC GCTGAAGTTC
1211
ACCGTGTACA AGGCCAAGAA GCCCGTGCAG CTGCCCGGCA ACCACTACGT
TGGCACATGT TCCGGTTCTT CGGGCACGTC GACGGGCCGT TGGTGATGCA
1261
GGACTCCAAG CTGGACATCA CCAACCACAA CGAGGACTAC ACCGTGGTGG
CCTGAGGTTC GACCTGTAGT GGTTGGTGTT GCTCCTGATG TGGCACCACC
1311
AGCAGTACGA GCACGCCGAG GCCCGCCACT CCGGCTCCCA GGGATCCAAG
TCGTCATGCT CGTGCGGCTC CGGGCGGTGA GGCCGAGGGT CCCTAGGTTC
EcoRIEcoRVSalIXhoIXbaISpeI
1361
CTTCTGCAGG AATTCGATAT CGTCGACAGA TCTCTCGAGT CTAGAACTAG
GAAGACGTCC TTAAGCTATA GCAGCTGTCT AGAGAGCTCA GATCTTGATC
1411
TGGGCCCGGT ACCTTAATTA ATTAAGGTAC CAGGTAAGTG TACCCAATTC
ACCCGGGCCA TGGAATTAAT TAATTCCATG GTCCATTCAC ATGGGTTAAG
pCMV-N-DsRed中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-DsRed)包括：
AclI
AflII
AscI
AsiSI
BaeI
BbvCI
BcgI
BlpI
BmgBI
Bpu10I
BsiWI
BsmBI
BspEI
BspQI
BssHII
BstXI
BstZ17I
EarI
EcoNI
Esp3I
FseI
NotI
NruI
PmeI
PmlI
PpuMI
PshAI
PspXI
SacII
SapI
ScaI
SgrAI
SmaI
SrfI
SwaI
TspMI
XcmI
XmaI
XmnI
pCMV-N-DsRed中的单酶切位点（Restriction enzymes that cut pCMV-N-DsRed once）包括：
AccI
GT’MK,AC
1383
KasI
G’GCGC,C
2988
AgeI
A’CCGG,T
664
MfeI
C’AATT,G
1741
AhdI
GACNN,N’NNGTC
856
MluI
A’CGCG,T
1877
AleI
CACNN|NNGTG
1304
MscI
TGG|CCA
3071
ApaI
G,GGCC’C
1416
NarI
GG’CG,CC
2989
ApaLI
G’TGCA,C
4593
NdeI
CA’TA,TG
240
BamHI
G’GATC,C
1352
NheI
G’CTAG,C
597
BbsI
GAAGACNN’NNNN,
1097
PaeR7I
C’TCGA,G
1394
BclI
T’GATC,A
1648
PciI
A’CATGT
4907
BmtI
G,CTAG’C
601
PflFI
GACN’N,NGTC
3107
BsaI
GGTCTCN’NNNN,
3978
PflMI
CCAN,NNN’NTGG
1258
BspDI
AT’CG,AT
2829
PluTI
G,GCGC’C
2992
BsrDI
GCAATG,NN’
3222
PspOMI
G’GGCC,C
1412
BsrGI
T’GTAC,A
1215
PvuI
CG,AT’CG
1494
BstBI
TT’CG,AA
3671
RsrII
CG’GWC,CG
3505
BstEII
G’GTNAC,C
817
SacI
G,AGCT’C
655
BtsI
GCAGTG,NN’
1830
SalI
G’TCGA,C
1382
ClaI
AT’CG,AT
2829
SbfI
CC,TGCA’GG
1017
CspCI
,NN’(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN’
382+417
SfiI
GGCCN,NNN’NGGCC
2764
EagI
C’GGCC,G
2895
SfoI
GGC|GCC
2990
Eco53kI
GAG|CTC
653
SnaBI
TAC|GTA
346
EcoRI
G’AATT,C
1370
SpeI
A’CTAG,T
1406
EcoRV
GAT|ATC
1378
Tth111I
GACN’N,NGTC
3107
HindIII
A’AGCT,T
1358
XbaI
T’CTAG,A
1400
HpaI
GTT|AAC
1754
XhoI
C’TCGA,G
1394
pCMV-N-DsRed质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
N-DsRed primer (1298-1317): 5'- TACACCGTGGTGGAGCAGTA -3'
T7 primer (1461-1482): 5'- GTAATACGACTCACTATAGGGC -3'
pCMV-N-DsRed的全序列信息请参考碧云天的网站上该质粒的信息。
pCMV-N-DsRed质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
图1. pCMV-N-DsRed质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。
包装清单：
KL-2705-1μg
pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白)
1μg
KL-2705-100μg
pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白)
100μg
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
