pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白)
pCMV-N-EGFP是信裕生物自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个EGFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-EGFP质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
Position
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
Multiple cloning site
1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site
1503-1524
SV40 polyA signal
1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication
2057-2363
Neomycin/kanamycin resistance ORF
205-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3697-4155
pCMV-N-EGFP质粒(5003bp)的图谱如下:
pCMV-Blank的多克隆位点的详细图谱如下:
651
GAGCTCTAGC
GCTACCGGTC
TGAGCAAGGG
CTCGAGATCG
CGATGGCCAG
ACTCGTTCCC
701
TTCACCGGGG
TGGTGCCCAT
CCTGGTCGAG
CTGGACGGCG
AAGTGGCCCC
ACCACGGGTA
GGACCAGCTC
GACCTGCCGC
751
CCACAAGTTC
AGCGTGTCCG
GCGAGGGCGA
GGGCGATGCC
GGTGTTCAAG
TCGCACAGGC
CGCTCCCGCT
CCCGCTACGG
801
AGCTGACCCT
GAAGTTCATC
TGCACCACCG
GCAAGCTGCC
TCGACTGGGA
CTTCAAGTAG
ACGTGGTGGC
CGTTCGACGG
851
CCCACCCTCG
TGACCACCCT
GACCTACGGC
GTGCAGTGCT
GGGTGGGAGC
ACTGGTGGGA
CTGGATGCCG
CACGTCACGA
901
CCCCGACCAC
ATGAAGCAGC
ACGACTTCTT
CAAGTCCGCC
GGGGCTGGTG
TACTTCGTCG
TGCTGAAGAA
GTTCAGGCGG
951
GCTACGTCCA
GGAGCGCACC
ATCTTCTTCA
AGGACGACGG
CGATGCAGGT
CCTCGCGTGG
TAGAAGAAGT
TCCTGCTGCC
1001
ACCCGCGCCG
AGGTGAAGTT
CGAGGGCGAC
ACCCTGGTGA
TGGGCGCGGC
TCCACTTCAA
GCTCCCGCTG
TGGGACCACT
1051
GCTGAAGGGC
ATCGACTTCA
AGGAGGACGG
CAACATCCTG
CGACTTCCCG
TAGCTGAAGT
TCCTCCTGCC
GTTGTAGGAC
1101
TGGAGTACAA
CTACAACAGC
CACAACGTCT
ATATCATGGC
ACCTCATGTT
GATGTTGTCG
GTGTTGCAGA
TATAGTACCG
1151
AAGAACGGCA
TCAAGGTGAA
CTTCAAGATC
CGCCACAACA
TTCTTGCCGT
AGTTCCACTT
GAAGTTCTAG
GCGGTGTTGT
1201
CAGCGTGCAG
CTCGCCGACC
ACTACCAGCA
GAACACCCCC
GTCGCACGTC
GAGCGGCTGG
TGATGGTCGT
CTTGTGGGGG
1251
GCCCCGTGCT
GCTGCCCGAC
AACCACTACC
TGAGCACCCA
CGGGGCACGA
CGACGGGCTG
TTGGTGATGG
ACTCGTGGGT
1301
AGCAAAGACC
CCAACGAGAA
GCGCGATCAC
ATGGTCCTGC
TCGTTTCTGG
GGTTGCTCTT
CGCGCTAGTG
TACCAGGACG
1351
GACCGCCGCC
GGGATCACTC
TCGGCATGGA
CGAGCTGTAC
CTGGCGGCGG
CCCTAGTGAG
AGCCGTACCT
GCTCGACATG
PstIEcoRIEcoRV SalIBglII XhoIXbaISpeI
1401
AGCTTCTGCA
GGAATTCGAT
ATCGTCGACA
GATCTCTCGA
GTCTAGAACT
TCGAAGACGT
CCTTAAGCTA
TAGCAGCTGT
CTAGAGAGCT
CAGATCTTGA
1451
AGTGGGCCCG
GTACCTTAAT
TAATTAAGGT
ACC
TCACCCGGGC
CATGGAATTA
ATTAATTCCA
TGG
pCMV-N-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-EGFP)包括:
AclI
AflII
AhdI
AscI
AsiSI
BaeI
BbsI
BbvCI
BlpI
BmgBI
BsiWI
BsmBI
BspEI
BspQI
BssHII
BstEII
BstXI
BstZ17I
EarI
EcoNI
FseI
NotI
NruI
PflMI
PmeI
PmlI
PpuMI
PshAI
PspXI
SacII
SapI
SbfI
ScaI
SgrAI
SmaI
SwaI
TspMI
XcmI
XmaI
XmnI
pCMV-Blank中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-Blank once)包括:
NdeI
CA`TA,TG
240
ApaI
G,GGCC`C
1454
SnaBI
TAC|GTA
346
PvuI
CG,AT`CG
1534
CspCI
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
380
BclI
T`GATC,A
1690
NheI
G`CTAG,C
597
MfeI
C`AATT,G
1783
BmtI
G,CTAG`C
597
HpaI
GTT|AAC
1796
Eco53kI
GAG|CTC
653
MluI
A`CGCG,T
1919
SacI
G,AGCT`C
651
BsaXI
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`
2080
AfeI
AGC|GCT
660
DraIII
CAC,NNN`GTG
2146
AgeI
A`CCGG,T
664
SfiI
GGCCN,NNN`NGGCC
2805
BcgI
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`
765
StuI
AGG|CCT
2854
BsrGI
T`GTAC,A
1386
ClaI
AT`CG,AT
2873
BamHI
G`GATC,C
1394
BspDI
AT`CG,AT
2873
HindIII
A`AGCT,T
1400
EagI
C`GGCC,G
2939
PstI
C,TGCA`G
1406
KasI
G`GCGC,C
3032
EcoRI
G`AATT,C
1412
NarI
GG`CG,CC
3033
EcoRV
GAT|ATC
1420
SfoI
GGC|GCC
3034
SalI
G`TCGA,C
1424
PluTI
G,GCGC`C
3032
AccI
GT`MK,AC
1425
MscI
TGG|CCA
3115
BglII
A`GATC,T
1430
PflFI
GACN`N,NGTC
3151
BsoBI
C`YCGR,G
1436
Tth111I
GACN`N,NGTC
3151
PaeR7I
C`TCGA,G
1436
BsrDI
GCAATG,NN`
3264
AvaI
C`YCGR,G
1436
RsrII
CG`GWC,CG
3549
XhoI
C`TCGA,G
1436
BstBI
TT`CG,AA
3715
XbaI
T`CTAG,A
1442
BsaI
GGTCTCN`NNNN,
4022
SpeI
A`CTAG,T
1448
ApaLI
G`TGCA,C
4637
PspOMI
G`GGCC,C
1454
PciI
A`CATG,T
4951
pCMV-N-EGFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
N-EGFP primer (1284-1303): 5'-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3'
T7 primer (1503-1524): 5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'
pCMV-N-EGFP的全序列信息:D2707 pCMV-N-EGFP-seq.txt
pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
图1. pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。
包装清单:
KL-2707-1μg
pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白)
1μg
KL-2707-100μg
pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白)
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。