产品编号 |
产品名称 |
产品包装 |
产品价格 |
D2707-100μg |
pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) |
100μg |
1086.00元 |
pCMV-N-EGFP是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个EGFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-EGFP质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
|
Position
|
CMV promoter
|
1-602
|
T3 promoter and T3 primer binding site
|
620-639
|
EGFP
|
677-1393
|
Multiple cloning site
|
1394-1483
|
T7 promoter and T7 primer binding site
|
1503-1524
|
SV40 polyA signal
|
1536-1919
|
f1 origin of ss-DNA replication
|
2057-2363
|
bla promoter
|
2388-2512
|
SV40 promoter
|
2532-2870
|
Neomycin/kanamycin resistance ORF
|
205-3696
|
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
|
3697-4155
|
pUC origin
|
4284-4951
|
pCMV-N-EGFP质粒(5003bp)的图谱如下:
pCMV-Blank的多克隆位点的详细图谱如下:
SacI EGFP
|
651
|
GAGCTCTAGC
|
GCTACCGGTC
|
|
TGAGCAAGGG
|
|
|
|
CTCGAGATCG
|
CGATGGCCAG
|
|
ACTCGTTCCC
|
|
|
701
|
TTCACCGGGG
|
TGGTGCCCAT
|
CCTGGTCGAG
|
CTGGACGGCG
|
|
|
|
AAGTGGCCCC
|
ACCACGGGTA
|
GGACCAGCTC
|
GACCTGCCGC
|
|
|
751
|
CCACAAGTTC
|
AGCGTGTCCG
|
GCGAGGGCGA
|
GGGCGATGCC
|
|
|
|
GGTGTTCAAG
|
TCGCACAGGC
|
CGCTCCCGCT
|
CCCGCTACGG
|
|
|
801
|
AGCTGACCCT
|
GAAGTTCATC
|
TGCACCACCG
|
GCAAGCTGCC
|
|
|
|
TCGACTGGGA
|
CTTCAAGTAG
|
ACGTGGTGGC
|
CGTTCGACGG
|
|
|
851
|
CCCACCCTCG
|
TGACCACCCT
|
GACCTACGGC
|
GTGCAGTGCT
|
|
|
|
GGGTGGGAGC
|
ACTGGTGGGA
|
CTGGATGCCG
|
CACGTCACGA
|
|
|
901
|
CCCCGACCAC
|
ATGAAGCAGC
|
ACGACTTCTT
|
CAAGTCCGCC
|
|
|
|
GGGGCTGGTG
|
TACTTCGTCG
|
TGCTGAAGAA
|
GTTCAGGCGG
|
|
|
951
|
GCTACGTCCA
|
GGAGCGCACC
|
ATCTTCTTCA
|
AGGACGACGG
|
|
|
|
CGATGCAGGT
|
CCTCGCGTGG
|
TAGAAGAAGT
|
TCCTGCTGCC
|
|
|
1001
|
ACCCGCGCCG
|
AGGTGAAGTT
|
CGAGGGCGAC
|
ACCCTGGTGA
|
|
|
|
TGGGCGCGGC
|
TCCACTTCAA
|
GCTCCCGCTG
|
TGGGACCACT
|
|
|
1051
|
GCTGAAGGGC
|
ATCGACTTCA
|
AGGAGGACGG
|
CAACATCCTG
|
|
|
|
CGACTTCCCG
|
TAGCTGAAGT
|
TCCTCCTGCC
|
GTTGTAGGAC
|
|
|
1101
|
TGGAGTACAA
|
CTACAACAGC
|
CACAACGTCT
|
ATATCATGGC
|
|
|
|
ACCTCATGTT
|
GATGTTGTCG
|
GTGTTGCAGA
|
TATAGTACCG
|
|
|
1151
|
AAGAACGGCA
|
TCAAGGTGAA
|
CTTCAAGATC
|
CGCCACAACA
|
|
|
|
TTCTTGCCGT
|
AGTTCCACTT
|
GAAGTTCTAG
|
GCGGTGTTGT
|
|
|
1201
|
CAGCGTGCAG
|
CTCGCCGACC
|
ACTACCAGCA
|
GAACACCCCC
|
|
|
|
GTCGCACGTC
|
GAGCGGCTGG
|
TGATGGTCGT
|
CTTGTGGGGG
|
|
|
1251
|
GCCCCGTGCT
|
GCTGCCCGAC
|
AACCACTACC
|
TGAGCACCCA
|
|
|
|
CGGGGCACGA
|
CGACGGGCTG
|
TTGGTGATGG
|
ACTCGTGGGT
|
|
|
1301
|
AGCAAAGACC
|
CCAACGAGAA
|
GCGCGATCAC
|
ATGGTCCTGC
|
|
|
|
TCGTTTCTGG
|
GGTTGCTCTT
|
CGCGCTAGTG
|
TACCAGGACG
|
|
|
BamHI HindIII
|
|
1351
|
GACCGCCGCC
|
GGGATCACTC
|
TCGGCATGGA
|
CGAGCTGTAC
|
|
|
|
CTGGCGGCGG
|
CCCTAGTGAG
|
AGCCGTACCT
|
GCTCGACATG
|
|
|
PstIEcoRIEcoRV SalIBglII XhoIXbaISpeI
|
|
1401
|
AGCTTCTGCA
|
GGAATTCGAT
|
ATCGTCGACA
|
GATCTCTCGA
|
GTCTAGAACT
|
|
|
TCGAAGACGT
|
CCTTAAGCTA
|
TAGCAGCTGT
|
CTAGAGAGCT
|
CAGATCTTGA
|
|
ApaI
|
|
1451
|
AGTGGGCCCG
|
GTACCTTAAT
|
TAATTAAGGT
|
ACC
|
|
|
TCACCCGGGC
|
CATGGAATTA
|
ATTAATTCCA
|
TGG
|
pCMV-N-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-EGFP)包括:
AclI
|
AflII
|
AhdI
|
AscI
|
AsiSI
|
BaeI
|
BbsI
|
BbvCI
|
BlpI
|
BmgBI
|
BsiWI
|
BsmBI
|
BspEI
|
BspQI
|
BssHII
|
BstEII
|
BstXI
|
BstZ17I
|
EarI
|
EcoNI
|
FseI
|
NotI
|
NruI
|
PflMI
|
PmeI
|
PmlI
|
PpuMI
|
PshAI
|
PspXI
|
SacII
|
SapI
|
SbfI
|
ScaI
|
SgrAI
|
SmaI
|
SwaI
|
TspMI
|
XcmI
|
XmaI
|
XmnI
|
|
|
pCMV-Blank中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-Blank once)包括:
NdeI
|
CA`TA,TG
|
240
|
|
ApaI
|
G,GGCC`C
|
1454
|
SnaBI
|
TAC|GTA
|
346
|
|
PvuI
|
CG,AT`CG
|
1534
|
CspCI
|
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
|
380
|
|
BclI
|
T`GATC,A
|
1690
|
NheI
|
G`CTAG,C
|
597
|
|
MfeI
|
C`AATT,G
|
1783
|
BmtI
|
G,CTAG`C
|
597
|
|
HpaI
|
GTT|AAC
|
1796
|
Eco53kI
|
GAG|CTC
|
653
|
|
MluI
|
A`CGCG,T
|
1919
|
SacI
|
G,AGCT`C
|
651
|
|
BsaXI
|
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`
|
2080
|
AfeI
|
AGC|GCT
|
660
|
|
DraIII
|
CAC,NNN`GTG
|
2146
|
AgeI
|
A`CCGG,T
|
664
|
|
SfiI
|
GGCCN,NNN`NGGCC
|
2805
|
BcgI
|
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`
|
765
|
|
StuI
|
AGG|CCT
|
2854
|
BsrGI
|
T`GTAC,A
|
1386
|
|
ClaI
|
AT`CG,AT
|
2873
|
BamHI
|
G`GATC,C
|
1394
|
|
BspDI
|
AT`CG,AT
|
2873
|
HindIII
|
A`AGCT,T
|
1400
|
|
EagI
|
C`GGCC,G
|
2939
|
PstI
|
C,TGCA`G
|
1406
|
|
KasI
|
G`GCGC,C
|
3032
|
EcoRI
|
G`AATT,C
|
1412
|
|
NarI
|
GG`CG,CC
|
3033
|
EcoRV
|
GAT|ATC
|
1420
|
|
SfoI
|
GGC|GCC
|
3034
|
SalI
|
G`TCGA,C
|
1424
|
|
PluTI
|
G,GCGC`C
|
3032
|
AccI
|
GT`MK,AC
|
1425
|
|
MscI
|
TGG|CCA
|
3115
|
BglII
|
A`GATC,T
|
1430
|
|
PflFI
|
GACN`N,NGTC
|
3151
|
BsoBI
|
C`YCGR,G
|
1436
|
|
Tth111I
|
GACN`N,NGTC
|
3151
|
PaeR7I
|
C`TCGA,G
|
1436
|
|
BsrDI
|
GCAATG,NN`
|
3264
|
AvaI
|
C`YCGR,G
|
1436
|
|
RsrII
|
CG`GWC,CG
|
3549
|
XhoI
|
C`TCGA,G
|
1436
|
|
BstBI
|
TT`CG,AA
|
3715
|
XbaI
|
T`CTAG,A
|
1442
|
|
BsaI
|
GGTCTCN`NNNN,
|
4022
|
SpeI
|
A`CTAG,T
|
1448
|
|
ApaLI
|
G`TGCA,C
|
4637
|
PspOMI
|
G`GGCC,C
|
1454
|
|
PciI
|
A`CATG,T
|
4951
|
pCMV-N-EGFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
N-EGFP primer (1284-1303): 5'-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3'
T7 primer (1503-1524): 5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'
pCMV-N-EGFP的全序列信息:D2707 pCMV-N-EGFP-seq.txt
pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
图1. pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。
包装清单:
产品编号
|
产品名称
|
包装
|
D2707-1μg
|
pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白)
|
1μg
|
D2707-100μg
|
pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白)
|
100μg
|
—
|
说明书
|
1份
|
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。