T4 DNA Polymerase

T4 DNA Polymerase

T4 DNA Polymerase，即T4 DNA聚合酶，是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以在结合有引物的单链DNA 模板上，从
5'→3'方向催化DNA合成反应。T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性，但不具有5'→3'外切酶活性。
特点：T4 DNA Polymerase由于同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'DNA外切酶活性，可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4 DNA Polymerase的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高，即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA Polymerase所消化。T4 DNA Polymerase的3'→5'外切酶活性比Klenow Fragment要高约200倍。
用途：T4 DNA Polymerase可用于催化以下反应：DNA 5'或3'突出末端的平滑化；通过置换反应进行标记DNA探针合成；定点突变过程中第二链的合成；不依赖于连接反应的PCR产物克隆。
来源：本T4 DNA Ligase由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：67mM Tris-HCl(pH8.8)，6.7mM MgCl₂，1mM DTT，16.7mM(NH₄)₂SO₄，0.2mg/ml BSA，
0.033mM of each dNTP，0.4MBq/ml[³H]-dTTP，0.2mM 热变性且经DNA酶部分消化过的小牛胸腺DNA。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液：20mM potassium phosphate(pH7.5)，200mM KCl，2mM DTT，and 50% glycerol。
Reaction Buffer(5X)：335mM Tris-HCl(pH8.8 at 25℃)，33mM MgCl₂，5mM DTT，84mM
(NH₄)₂SO₄。
缓冲液兼容性：在信裕生物的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X G中的活性为75-100%。
失活或抑制：70℃加热10分钟可使T4 DNA Polymerase失活。金属离子螯合剂可以抑制T4 DNA Polymerase的活性。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存。
注意事项： 
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. DNA 5'或3'突出末端平滑化：
a. 参考如下表格设置反应体系：

b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 11℃孵育20分钟，或室温(20-25℃)孵育5分钟。
d. 70℃孵育10分钟终止反应。
2. 其他用途请自行参考T4 DNA Polymerase的相关文献资料进行。