Klenow Fragment

Klenow Fragment

Klenow Fragment，又称Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)。
Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。Klenow Fragment的3'→5'外切酶活性保证了其合成DNA时的准确性(proofreading)。
特点：对于5'突出或3'突出的粘末端都可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。
用途：双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的补平(fill-in)；双链DNA 3'突出(3'overhang)的打平(也称削平)；5'突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序；cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。 
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA 基因片段。
分子量：约68kDa(单体)。
活性定义：37℃30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl₂，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM 
dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[³H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl₂，10mM DTT。
缓冲液兼容性：在信裕生物的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X G中的活性为
100%；在信裕生物的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为100%。
失活或抑制：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment有抑制作用。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存。
注意事项： 
酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的补平：
a. 参考如下表格设置反应体系：

b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育10分钟。
d. 75℃孵育10分钟终止反应。
2. 双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：

b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 30℃孵育15分钟。
d. 75℃孵育10分钟终止反应。
3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。