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一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装

One-Stop miRNA Urea-PAGE Pack
1390 30次 起订
上海 更新日期:2024-03-28

上海泽叶生物科技有限公司

VIP5年
联系人:宛双凤
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邮箱:sale1@shzysw.net

产品详情:

中文名称:
一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装
英文名称:
One-Stop miRNA Urea-PAGE Pack
保存条件:
常温运输和保存
纯度规格:
99.99%
产品类别:
分子生物学 核酸电泳及回收

一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装

 

产品及特点尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是单独配 制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点:

1. 一站式,含有电泳所需要的所有试剂,即开即用,十分方便,免去了实 验人员称取有毒物品。

2. 灵活,可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE,以便对长度各异的 RNA 进行电泳。

3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交等实验。

4. 使用新型缓冲液,可以防止甘油的干扰。 
规格及成分 成份 编号 大纸盒包装
运输及保存 尿素 100873 210 g RT 丙烯酰胺 100864 60g,用 250mL 瓶 RT 甲叉双丙烯酰胺 100877 3g RT TBE 电泳液, 10× 90313 250 mL RT TEMED 110-18-9 1.5 mL RT 过硫酸铵 100879 1 g RT miRNAON 70608 1.5 mL 低温/-20℃ miRNA Marker 70605 150 uL 低温/-20℃ 固相 RNase 清除剂 3090 250 mL RT 使用手册 70606sc 1 份 RT

运输及保存 常温运输和保存,miRNAon、miRNA Marker 需要低温运输,-20℃保存, 保存期一年。

自备试剂 miRNA 样品、RNase-free 水。

使用方法

1. 准备工作:用固相 RNase 清除剂清洁工作平台 直接将固相 RNase 清除剂原液或 10 倍的新鲜稀释液喷于台面,5 分钟后 用普通吸水纸擦净,后用沾有固相 RNase 清除剂 1000 倍新鲜稀释液的 吸水纸擦净,晾干。

2. 准备工作:用固相 RNase 清除剂清洁玻璃和塑料器皿 将器皿浸泡在固相 RNase 清除剂的 10 或 100 倍的新鲜稀释液中,静置 处理 5 分钟后取出,再用固相 RNase 清除剂 1000 倍或 10000 倍新鲜稀 释液浸泡二次以上,倒立晾干后备用。 

3. 配制 1×TBE 电泳液: 将适量的 10×TEB 电泳液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1×TBE 电泳液待用。此溶液需要现用现配,否则易长菌。

4. 配制 10%过硫酸铵溶液: 精确称取100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中,按每 1 mg 过硫酸铵加 10 μL RNase-free水的比例加入 RNase-free 水,摇晃溶解待用。10%过硫酸铵溶液有效期不超过一周。

5. 估计所需要的凝胶溶液的体积,一般配制一块 13 cm×15 cm× 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液,配制一块 36 cm×45 cm×0.8 mm 的胶需 要 120 mL 凝胶溶液。

6. 配制 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液:将 3g 甲叉双丙烯酰胺加入到 装有 60g 丙烯酰胺干粉的瓶中,再加入 130 mL RNase-free 水,充分摇 晃混匀即得 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。

7. 根据所需要的凝胶溶液的体积,在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分

8. 搅拌并加热到 40-50℃左右,直到尿素完全溶解。

9. 冷却到室温后,将三角瓶接上真空系统抽真空处理 10-15 分钟以充分去除 溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。若条件有限,此步可省略。

10. 边摇晃溶液变加入 50 μL TEMED 和 500 μL 10%过硫酸铵。注意:如果 选择其他工作浓度的 Acrylamide/Bis,此二成分的用量不需要随之改 变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化,此二成分的用量要按比例改变。

11. 再充分摇晃约 30 秒后迅速灌胶,然后插入样品梳,室温放置 30-60 分钟 等待胶凝固。

12. 将凝胶板放置在电泳装置上后,在上下层分别加入适当量的 1×电泳缓冲 液。如果不马上使用,需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。

13. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液,充分将每个加样空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。

14. 在上样前,预电泳 20-30 分钟以使多余的过硫酸铵跑出加样空,同时还可 以使凝胶的温度升高(到 50℃左右),有利于 RNA 变性状态。

15. 将 miRNA 样品与等体积的 miRNAon 混合,70℃保温 2-3 分钟后迅速放 置在冰上冷却,快速离心半分钟,放冰上待用。miRNA Marker 需要每个 上样孔用 5μL,一块胶好在两侧各用一个孔上样 miRNA Marker。

16. 关电泳仪后开始上样。

17. 重开电泳仪,对 13 cm×15 cm 的胶,以 20-30mA 的电流电泳,直到红 色染料移动到凝胶边缘为止;对36 cm×45 cm 的胶,则以 50-60mA 的 电流电泳,直到红色染料移动到凝胶边缘为止。

18. 染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的 凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 μL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天泽基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 μL DNAgreen 原 液)。 UV 下观察并拍照。

19. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后进行胶回收处理。

20. Northern 杂交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。

21. 放射自显影:如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的 玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保 鲜膜,真空抽干,然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。

 

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公司简介

上海泽叶生物科技有限公司是一家服务于生命科学领域的高新技术企业,主要为科研机构、高校、院所及企业产品开发研究提供所需要的科研类试剂、耗材、仪器、技术服务等。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学、材料科学,通用试剂、药物合成试剂、手性化合物、催化剂及配体、分析试剂、生物试剂,检测试剂等等

成立日期 (8年)
注册资本 100万元整
员工人数 1-10人
年营业额 ¥ 100万以内
经营模式 贸易,试剂,定制,服务
主营行业 生物化工,有机原料,化学试剂,医药原料,技术服务

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