一站式DNA尿素-PAGE电泳套装

一站式DNA尿素-PAGE电泳套装

产品及特点本产品是专门用于 DNA 尿素-PAGE 电泳的一站式试剂盒，它具有下列特 点:

1. 一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。用户不需要 单独准备各种成分。

2. 可用于 DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE 和 RNase 保护实验等。

3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。

4. 电泳后可直接用于银染、EB 染色等实验。
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装 
保存 条件 电泳级尿素 100873 210g（红盖瓶） 常温 电泳级丙烯酰胺 100876 60g（250mL 棕色瓶） 常温 电泳级甲叉双丙烯酰胺 100877 3g（橘黄盖） 常温 10×TBE 电泳液 90313 250 mL 常温 电泳级 TEMED 100880 1.5 mL（棕色管） 常温 电泳级过硫酸铵 100879 1 g（蓝盖） 常温 2×尿素-PAGE 上样液 100874 1 mL（棕色管） 4℃ 使用手册 90317sc 1 分 RT

运输及保存 常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

自备试剂 去离子水 

使用方法

一、PAGE 浓度和交联度的选择指南

尿素-PAGE 一般推荐用 29：1（丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺）的交联度， 

二、制备尿素-PAGE 胶

1. 配制尿素-PAGE 胶（这是配制 100 mL 胶的用量，配制更大体积的胶则需 以此用量为基础按比例增加） A：新鲜配制 10%的 APS（过硫酸铵）：按每 0.1 克过硫酸铵干粉加 1mL 超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的 1.5 mL EP 管中，摇晃到粉 末全部溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可以在 4℃存放一周。

B：新鲜交联度为 29：1 的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（AB 溶 液，下同）：在装有丙烯酰胺干粉的 250mL 棕色塑料瓶中加入 120 mL 自备的去离子水，然后将全部甲叉双丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中（可 以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙烯 酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中）。充分摇晃混匀后所得溶液 即 40%的 AB 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出 足够空间加尿素。

B：配尿素-PAGE 胶：在一个 250 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入 去离子水、40%AB 溶液和 10×TBE 缓冲液。丙烯酰胺单体溶液具有 神经毒性，一定要戴手套操作。 

C：搅拌溶解，然后用滤纸过滤。好能抽真空 10-15 分钟以去除溶液中 的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应），无条件也可以不脱氧。

D：加入 500uL 10%APS 和 100uL TEMED，迅速摇匀后倒胶。

E: 在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。

F: 室温聚合 30-60 分钟（低温抑制聚合反应）。

三、样品准备

2. 对一般样品、测序样品、微卫星 DNA、AFLP 样品、DDRT 样品、RPA 样 品：将样品跟上样液 1:1 混合，95℃ 3 分钟变性，然后放冰上待用。

3. 对 TGGE 样品：可以直接上样。 四：电泳

4. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够 0.5×TEB 电泳液

5. 预电泳 5-30 分钟将冰上放置的样品上样。

6. 连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率（固定功率可以固定 产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压， 产热都将随电泳时间而变化，不好控制）。 对小胶一般用 5-6W 固定功率，大胶用 15-25W 固定功率。

7. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理（如银染）。注意：如果银染，必须延 长固定时间以便让洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。 

G: 拔出梳子，用 0.5×TEB 液冲洗加样孔。