RIPA裂解液（弱强度）

RIPA裂解液（弱强度）
产品及特点RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等实验。本产品裂解能力强度温和，对膜蛋白的处理能力一般；对核蛋白的提取能力较好；对胞浆蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子处理效果很好。本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种 RIPA 裂解液产品特点见下表：

产品名称RIPA 裂解液(强)RIPA 裂解液(中)RIPA 裂解液(弱)

有效裂解成分

1% Triton

X-100, 1%

deoxycholate,

0.1% SDS

1% NP-40,

0.5%

deoxycholate,

0.1% SDS

1% NP-40,

0.25%

deoxycholate

裂解强度 强 中 温和

对膜蛋白的提取 很好 较好 一般

对胞浆蛋白的提取 很好 很好 很好

对核蛋白的提取 很好 较好 较好

胞浆磷酸化蛋白提取 很好 很好 很好

细胞核转录因子提取 很好 很好 很好

含蛋白酶抑制剂 是 是 是

含磷酸酯酶抑制剂 是 是 是

主要用途 WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP
规格及成分 成 份 100 mL 包装
本产品 100 mL
使用手册 1 份

RIPA裂解液（弱强度）运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂 PMSF

使用方法 对于培养细胞样品：

1. 融解 RIPA 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，

使 PMSF 的最终浓度为 1mM。

2. 裂解细胞

2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血

清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比

例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2

秒后，细胞就会被裂解。

2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

注意：通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。

对于组织样品：

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解 RIPA 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。

3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注：RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。