RIPA裂解液（强）

RIPA裂解液（强）

简介：

多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液(强) (Enhanced RIPA Lysis Buffer)是采用一种经典的裂解方法获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可用于PAGE电泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。 Weak RIPA Lysis Buffer主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

伊势久RIPA裂解液（强）的主要由Tris、NP40、deoxycholate等组成，有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

组成：

存储条件：

RIPA裂解液保存于-20℃。12个月有效期。 

操作步骤(仅供参考)：

无需配制，直接使用。

(一)贴壁培养细胞

• 1、 取Enhanced RIPA lysis buffer室温溶解混匀，使用前取适量裂解液加入PMSF，使终浓度为1mM。 

2、 去除贴壁细胞的培养液，低速离心，弃上清。

3、 按照6孔板每孔加入150～250 ul含有PMSF的裂解液的比例，加入RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解。通常裂解液作用于细胞内，细胞就会被裂解/如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃裂解。 通常裂解液作用于细胞1～3秒内，细胞就会被裂解。

4、 离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5、 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。。

• 取Enhanced RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀，使用前取适量裂解液加入PMSF，使终浓度为1mM。 

2、 去除贴壁细胞的培养液，低速离心，弃上清，留取沉淀。 

3、 按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Enhanced RIPA Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞内，细胞就会被裂解/如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃裂解。 

4、 离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。 

5、 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。 

(二)悬浮培养细胞 

1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer置于室温溶解混匀后，使用前取适量裂解液加入PMSF，使其最终浓度为1mM。 

2、 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。 

3、 用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Weak RIPA Lysis Buffer。 

4、 4℃离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。 

5、 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。 

(三)组织样本                                                                                      

1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，使用前取适量裂解液加入PMSF，使其最终浓度为1mM。 

2、 把组织剪切成细小的碎片，越小越好。 

3、 取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。 

3、 按20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。

4、 离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。 

5、 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。 

注意事项：

1、 去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。 

2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减 少裂解液的用量。

3、 在培养细胞的裂解中，如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/离心管，然后再裂解。少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接粗，相对比较容易裂解充分。

4、 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。

5、 溶解Enhanced RIPA Lysis Buffer r时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。 

6、 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。