加A试剂盒

加A试剂盒
产品及特点本产品利用 Taq DNA polymerase 的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有 dATP 存在的情况下，在平末端的 DNA 片段加上一个 dA 尾巴，使平末端片段也能被 T 载体克隆。

1. 简单，2 X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。

2. 适用于任何平末端的 DNA 片段，包括 Pfu DNA polymerase 等酶合成的 DNA 片段。

3. 产物可以直接用于与 T 载体的连接。
加A试剂盒
规格及成分 成份 编号 塑料袋包装
2 X Tailing Buffer 60105A 1 mL
Taq DNA polymerase (5U/uL) 51206 50 μL
使用手册 60105sc 1 份

加A试剂盒运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 PCR 片段、超纯水

使用方法 一：反应前纯化处理：

用 Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有 3 到 5 外切活性的 DNA 聚合酶扩增得到的 DNA 片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯仿抽提或 Proteinase K 处理），否则它们将在加 A 反应时，切除掉加上的 尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或 TE 中，终浓度以 0.1 ug/uL 为宜。

二：加 A 反应

在干净的 0.5 mL 或 1.5 mL 离心管中，分别加入下列成分：

回收的 DNA 片段(0.2-2 ug)

25 uL 2 X dA Tailing Buffer

1 uL Taq DNA polymerase（5 U/uL）

补水到 50 uL 后 72℃保温 2 小时

三：反应后处理

加 A 反应后，Taq DNA polymerase 将与 DNA 末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用 Proteinase K 处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的 DNA 溶于适量水和 TE 中后即可用于 T 载体的连接反应。