Hesperadin

Selleck中国

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生物活性

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

客户使用selleck产品的实验数据:

激酶实验: ^[1]

细胞试验: ^[1]

Hesperadin
422513-13-1

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其他更新日期：2020-01-17

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英文名称：: Hesperadin

CAS号：: 422513-13-1

规格：: 5mg/10mg/10mM/1mL/50mg

货号：: S1529

Selleck Chemicals美国品牌，中国库存现货，Aurora Kinase抑制剂，CAS#422513-13-1。
更多详情请访问中国唯一官方网站：
http://www.selleck.cn/products/Hesperadin.html

selleck产品在文献中的引用:

Nat Commun, 2011, 2:316

Curr Biol, 2011, 21(16):1356-65

EMBO Rep, 2012, 13(9):847-54

J Cell Biol, 2012, 199(2):251-68

Mol Cell Proteomics, 2012, 11(11):1220-9

Aurora B激酶实验	Aurora B激酶实验中, HeLa细胞溶解在含50 mM NaCl的buffer中。使用台式离心机对全部细胞抽提物进行离心，13,000 rpm 4^oC下离心20分钟。200 mg 全部细胞抽提物在含250 mM NaCl的15 mL溶解buffer中再次提取，为了从有丝分裂染色质中获得活性Aurora B激酶。第二次提取的低速悬浮液用于免疫沉淀反应。鼠单抗AIM-1或HA与GammaBind Plus凝胶耦合,在抽提物中4^oC下旋转90分钟。冲洗，等分，然后在激酶buffer(20 mM Tris,pH 7.5,150 mM NaCl,10 mM MgCl₂,1 mM DTT,10 mM NaF)中冲洗。在20 μL含5 μg 组蛋白H3,10 μM ATP, 2.5 μCi[γ-³²P]ATP, 和不同浓度Hesperadin的激酶 buffer中进行激酶实验，37^oC下持续20分钟。加入SDS样本，煮饭，进行SDS-PAGE。烘干凝胶。通过PhosphorImager分析系统测定放射信号。使用ImageQuant软件分析数据。

Aurora B激酶实验

Aurora B激酶实验中, HeLa细胞溶解在含50 mM NaCl的buffer中。使用台式离心机对全部细胞抽提物进行离心，13,000 rpm 4^oC下离心20分钟。200 mg 全部细胞抽提物在含250 mM NaCl的15 mL溶解buffer中再次提取，为了从有丝分裂染色质中获得活性Aurora B激酶。第二次提取的低速悬浮液用于免疫沉淀反应。鼠单抗AIM-1或HA与GammaBind Plus凝胶耦合,在抽提物中4^oC下旋转90分钟。冲洗，等分，然后在激酶buffer(20 mM Tris,pH 7.5,150 mM NaCl,10 mM MgCl₂,1 mM DTT,10 mM NaF)中冲洗。在20 μL含5 μg 组蛋白H3,10 μM ATP, 2.5 μCi[γ-³²P]ATP, 和不同浓度Hesperadin的激酶 buffer中进行激酶实验，37^oC下持续20分钟。加入SDS样本，煮饭，进行SDS-PAGE。烘干凝胶。通过PhosphorImager分析系统测定放射信号。使用ImageQuant软件分析数据。

Hesperadin可有效抑制Aurora B，IC50为250 nM，显著降低AMPK， Lck， MKK1， MAPKAP-K1， CHK1和PHK的活性，但是在体内不会抑制MKK1活性。

人类Aurora B

T. brucei Aurora 激酶-1 (TbAUK1)

Hesperadin抑制磷酸化组蛋白 H3的免疫沉淀物 Aurora B，IC50为250 nM，且浓度为1 μM时明显降低其他激酶(AMPK,Lck,MKK1,MAPKAP-K1,CHK1,和PHK)活性。20-100 nM Hesperadin 作用于HeLa细胞，诱导有丝分裂的组蛋白H3在Ser10 位点的磷酸化作用丧失。Hesperadin 处理，引起有丝分裂和细胞质分裂缺陷, 导致HeLa 细胞增殖和多倍体化停止, 这是因为在染色体连接过程中Aurora B功能受抑制。100 nM Hesperadin可恢复紫杉醇或Monastrol而不是Nocodazole 诱导的有丝分裂停滞。Hesperadin和Nocodazole处理HeLa细胞，废除BubR1着丝粒区域化，且降低 Bub1在着丝粒处的强度, 说明 Aurora B 功能对BubR1 和Bub1着丝点高效募集是必需的, 可说明对延长检测点信号是必需的。^[1] 在体外激酶实验中，Hesperadin通过来自致病的锥虫属brucei 的T. brucei Aurora 激酶-1 (TbAUK1)而阻断重组锥虫组蛋白H3磷酸化，IC50为40 nM 。Hesperadin 明显抑制培养的传染性血液形式(BF)细胞生长，IC50为48 nM,且微弱抑制昆虫循环阶段形式(PF)细胞生长 IC50为550 nM。^[2]

细胞系	HeLa细胞和PtK1细胞
浓度	终浓度为500 nM 左右
处理时间	24和48小时
方法	不同浓度Hesperadin分别处理细胞24和48小时。在指定时间点, 用PBS冲洗甲醇混合的细胞样本，随后在PI buffer(50 μg/mL 碘化丙碇,10 mM Tris,pH 7.5,5 mM MgCl₂,200 μg/mL RNase A)中37^oC下反应20到40分钟。通过流式细胞仪测定DNA量。