First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV)

General description

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RNA的扩增需要将RNA底物转换为DNA。这一反应通过AMV RT（禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶）或M-MuLV RT（莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶）等逆转录酶介导。所获得的cDNA可作为标准PCR的模板。
AMV RT合成cDNA链的起始位点，由所使用引物的类型决定：

• 使用oligo-p(dT)₁₅作为引物时，以poly（A) mRNA的3’端作为起始位点，
• 使用随机引物p(dN)₆时，在mRNA模板的非特异性位点起始
• 使用序列特异性引物时，在特定位点起始。 

   

  使用AMV RT进行链cDNA合成具有某些优势。此酶比M-MuLV逆转录酶具有更高的热稳定性，允许反应在+42°C下进行，因而比+37°C的反应条件具有更高的特异性和对二级结构更好的解析能力。

  链cDNA合成试剂盒适用于链cDNA的合成反应，这一反应可作为两步法RT-PCR实验的起始步骤。本品能够兼容序列特异性的引物，poly(dT)₁₅引物，或随机引物。
  本试剂盒包含用于链合成的逆转录酶AMV，两条不同的引物，我们的PCR核苷酸混合物（PCR Nucleotide Mix）与Neo pa RNA对照品。RT-PCR反应生成的PCR产物可通过标准步骤实施分子克隆操作。

  Other Notes

  仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

  包装

  1 kit containing 10 components.

  Quality

  在标准的cDNA合成分析中，使用1.0 μg Neo pa RNA模板与20 μ Ci [α-³²P]-dCTP（特异活性为3000 Ci/mmol）在+42°C下共孵育60分钟后，至少制备出300 ng cDNA（即30%的得率）。

  Specificity

  热灭活：在95℃处理5min
  逆转录酶AMV

  Unit Definition

  体积活性：20 到 25 U/μl

  Application

  The First Strand cDNA Synthesis Kit can be used with either sequence-specific primers, poly(dT)₁₅ primers, or random primers, or gene-specific primers (not part of the kit). It can be used for the: 
  • Detection of the presence or absence of RNA viruses or other RNA-containing microorganisms (in combination with PCR)
  • Quantification of mRNA for monitoring differential expression of a specific mRNA.
  • First step in the "differential display of mRNA"

  ^[1]

  
  • Generation of cDNA libraries with large and full-lenght inserts