AZD6482

生物活性产品描述 AZD6482是一种PI3Kβ抑制剂，IC50为10 nM，作用于PI3Kβ比作用于PI3Kδ， PI3Kα和PI3Kγ选择性分别高8，87和109倍。Phase 1。 靶点 PI3Kβ [1] PI3Kδ [1] DNA-PK [1] PI3Kα [1] PI3Kγ [1] IC50 10 nM 80 nM 420 nM 870 nM 1090 nM 体外研究 AZD6482是PI3Kβ抑制剂，IC50为21 nM, 然而, AZD6482也抑制PI3Kα,γ,和δ, IC50为 80 nM到1.4 μM, 明显比其(+)-对印异构体(S型)低很多。AZD6482是抗血小板药，在洗涤血小板聚集(WPA)实验中，抑制活化血小板粘附/聚集，且促进血小板解聚，IC50为6 nM。而且, AZD6482靶向作用于PI3Kβ，特定抑制血栓形成而不影响正常止血。因此, AZD6482作为抗血栓药，用于预防血栓疾病。[1] 体内研究 特征 AZD6482是PI3Kβ抑制剂，作为抗血小板和抗血栓的药剂。 推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性) 激酶实验: [1] 抑制PI3K酶实验 通过AlphaScreen酶活性测定使用人重组酶测定对PI3Kβ, PI3Kα, PI3Kγ和 PI3Kδ的抑制效果。该法测量PI3K调节的PIP2和PIP3之间的转换。生物素化的PIP3，即GST-标记的血小板-白细胞C 激酶底物同源(PH) 域和两个AlphaScreen 磁珠形成复合体，在680 nm处形成激光信号。在酶反应复合体中形成的PIP3与生物素化的 PIP3竞争性地结合到PH 域，引起提高酶产物，降低信号。AZD6482 溶于DMSO，加到385孔板上。PBKβ, PBKα, PBKγ, 或PBKδ加到 Tris buffer(50 mM Tris pH 7.6, 0.05% CHAPS, 5 mM DTT, 和24 mM MgCl2) 中，和AZD6482 预温育20分钟，然后加入含 PIP2和ATP的底物溶液。20分钟后，加入含EDTA 和生物素-PIP3的终止液，而终止酶反应,随后加入含GST-grpl PH 和AlphaScreen磁珠的检测液。实验板在暗中放置最少5小时，然后用于实验分析。实验中DMSO, ATP和 PIP2 的最终浓度分别为0.8%, 4 μM, 和40 μM。计算IC50值。 细胞试验: [1] 细胞系 人血小板颗粒 浓度 0-60 nM, 溶于 DMSO 处理时间 5分钟 方法 在洗涤血小板聚集 (WPA)实验中,从人血液中分离血小板颗粒，再悬浮在含1 μM水蛭素和0.02 U/mL三磷酸腺苷双磷酸酶的2×1015/L Tyrodes buffer 中。然后，血小板悬浮液在室温下搁置30分钟。实验开始前，加入CaCl2，终浓度为2 mM。AZD6482, 溶于DMSO,加到96孔板中，然后 加入洗涤的血小板悬液。血小板悬液和 AZD6482预温育5分钟。在650 nm处记录吸光值，然后震荡板5分钟再记录吸光值，记为R0和Rl。每孔加入特定浓度的小鼠 抗人CD9抗体 ，震荡板10分钟，记录吸光值，记为R2。用于数据分析, 除去所有数据中和TB结合而测定的吸光值，然后根据公式: [(R1-R2)/R1]×100 计算聚集百分数。另外，根据同样公式 [(R0-Rl)/R0]×100 评定抑制剂的自发聚集效果。然后测定IC50值。 不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA指南） 小鼠 大鼠 兔 豚鼠 仓鼠 狗 猴 狒狒 重量 (kg) 0.02 0.15 1.8 0.4 0.08 10 3 12 体表面积 (m2) 0.007 0.025 0.15 0.05 0.02 0.5 0.24 0.6 Km 系数 3 6 12 8 5 20 12 20 动物A (mg/kg) = 动物B (mg/kg) × 动物B的Km系数 动物A的Km系数 例如，依据体表面积折算法，将白藜芦醇用于小鼠的剂量22.4 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将22.4 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到白藜芦醇用于大鼠的等效剂量为11.2 mg/kg。大鼠剂量 (mg/kg) = 小鼠剂量 (22.4 mg/kg) × 小鼠的Km系数(3) = 11.2 mg/kg 大鼠的Km系数(6) 1 参考文献 [1] Fjellstrom O, et al. US Patent, WO2009093972.Clinical Trial Information( data from http://clinicaltrials.gov) NCT Number Recruitment Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases NCT00853450 Completed Antiplatelet Effect AstraZeneca February 2009 Phase 1 NCT00688714 Completed Antiplatelet Effect AstraZeneca January 2008 Phase 1 化学数据点击下载AZD6482 (SDF格式文件) 分子量 408.45 化学式 C22H24N4O4 CAS号 1173900-33-8 稳定性 3年 -20℃粉状 6个月-80℃溶于溶剂 别名 KIN-193 溶解性 (25°C) * 体外 DMSO 82 mg/mL (200.75 mM) 乙醇 10 mg/mL (24.48 mM) 水 <1 mg/mL (<1 mM) 体内 30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol 30 mg/mL * <1 mg/ml 指产品微溶或不溶* 溶解度检测是由Selleck技术部门检测的，可能会和文献中提供的溶解度有所差异，这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。 .Chemical Name (R)-2-(1-(7-methyl-2-morpholino-4-oxo-4H-pyrido[1,2-a]pyrimidin-9-yl)ethylamino)benzoic acid 制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg 1 mM 2.4483 mL 12.2414 mL 24.4828 mL 5 mM 0.4897 mL 2.4483 mL 4.8966 mL 10 mM 0.2448 mL 1.2241 mL 2.4483 mL 50 mM 0.0490 mL 0.2448 mL 0.4897 mL 摩尔浓度计算器 稀释计算器 分子量计算器 Research Area 客户使用Selleck产品的实验数据(2) 点击放大 Dose response curve of compound on melanoma cell lines. Compound was dissolved in DMSO, added in a 5-fold dilution series, starting with 10 μM, and incubated for 72 hours. Fluorescence was measured after 8 hours incubation in resazurin. Data was normalized to DMSO (maximal viability) and Doxorubicin (minimum viability). 评级 数据来源于 One customer. AZD6482购于Selleck 方法 Cell growth inhibition assay 细胞系 Melanoma cell lines 浓度 0.00000512-10 μM 处理时间 72 h 结果 AZD6482 treatment inhibited Melanoma cells growth in a does-dependent manner.