DiBAC4(3)

产 品 说 明

产品名称：DiBAC4(3)
产品货号：D-4008
产品规格：25 mg
应用范围：膜电位染色

产品参数
外观：可溶于DMF或DMSO的橘色固体
贮存条件：-20℃ 保存
保质期：12个月
CAS号：70363-83-6
分子式：C27H40N4O6
分子量：519
分子结构图：

产品介绍
DiBAC4(3)是一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子
荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋
白质结合后才发出荧光。当DiBAC4(3)进入细胞后，
指示细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去
极化；反之，若细胞内荧光强度降低，即膜电位降低
表示细胞超极化。

使用方法
1、储存液配制：产品可以用DMSO、无水乙醇或纯水溶
解，用DMSO配制成10 mM的母液储存，如果低浓度也
可以满足要求也可用纯水配制。
2、用荧光显微镜测定膜电位
(1)试剂：DiBAC4(3)；Dulbecco’s MEM (DMEM)；
FBS (fetal bovine serum)
(2)实验步骤
1) 将消化好的细胞移至DMEM培养基中。
2) 加入FBS，控制浓度范围在：2～15% 。
3) 加入DiBAC4(3)，控制浓度范围在：1～5 μM/L。
4) 用荧光显微镜观察刺激后荧光强度的变化，可用氩离
子激光(488 nm) 的激光共聚焦显微镜检测。由于
DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变，所以必须在37℃
条件下测定。当细胞膜电位发生变化，可以观察到细胞内
的荧光强度的变化。
3、用酶标仪测定膜电位
(1)试剂：DiBAC4(3)；检测用缓冲液 (pH7.4; 20 mmol/L
HEPES, 120 mmol/L NaCl, 2 mmol/L KCl, 2 mmol/L
CaCl2, 1 mmol/L MgCl2, 5 mmol/L glucose)
(2)实验步骤
1) 培养细胞：在微孔板中培养细胞
2) 清洗细胞：用含5 μM/L DiBAC4(3) 工作缓冲液200
μL，清洗微孔板中培养的细胞2次
3) 染色：在微孔板中加入180 μL含5 μM/L DiBAC4(3)
的工作缓冲液，在5% CO2，37℃培养箱中孵育30分钟。
4) 测定：用荧光酶标仪观察刺激后细胞内荧光强度的变化。
由于DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变，所以必须在
37℃的条件下测定，加入20 μL含DiBAC4(3) 的工作缓冲
液，每隔30秒测定1次荧光变化。
4、 膜电位的标准曲线
(1)原理：膜电位变化时色素的分布也随之变化，所以荧光
强弱和吸收强度也会变化。这种变化程度取决于色素的分
子数和细胞数的比率、色素的浓度以及细胞的种类。膜电
位的标准曲线是通过用电极直接测定目的细胞的膜电位，
在该电位所测得的荧光和吸收强度而制得的。
(2)试剂：DiBAC4(3)；Eagle-Dulbecco medium；PBS
(3)方法
1) 用Eagle-Dulbecco medium培养细胞。
2) 取PBS中的细胞在37℃的CO2培养箱中孵育30～60分
钟，然后改变孵育时间，制备不一样的CO2浓度的样品。
3) 加入DiBAC4(3)，终浓度为2 μM/L。
4) 20分钟后，在517 nm测定各个浓度的荧光强度，并
用电极直接测定此时的电位差。
5) 用荧光强度和对应的电位差来制作标准曲线。
(4)其他方法
有钾扩散电位和荧光或吸收强度比较的方法。缬氨霉素
引起钾扩散电位，钾扩散电位 (V) 是按照Nernst 方程
计算如下：
V=-RT/F log[K+]in/[K+]out=-59 log[K+]in/[K+]out (mV)
在缬氨霉素存在时，通过改变细胞外钾离子浓度和细胞内
钾离子浓度，计算扩散电位，测定各个电位的荧光或吸
收强度，比较后可以制得标准曲线。
注意事项
1、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓
荧光淬灭。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操
作。

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