BMS-707035

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其他更新日期：2019-12-18

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产品详情:

英文名称：: BMS-707035

规格：: 5mg/10mM/1mL/10mg/50mg

货号：: S1366

Selleck Chemicals美国品牌，中国库存现货，Integrase抑制剂，CAS#729607-74-3。
更多详情请访问中国唯一官方网站： http://www.selleck.cn/products/BMS-707035.html

生物活性

产品描述	BMS-707035是一种特异性的HIV-I integrase (IN)（整合酶）抑制剂，IC50为15 nM。Phase 2。
靶点	HIV 整合酶(IN)
IC50	15 nM ^[1]
体外研究	BMS-707035是与Raltegravir相似的嘧啶酰胺, 是个应用到临床的整合酶抑制剂。BMS-707035 是有效的，特定 HIV的可逆抑制剂，抑制HIV整合酶链转移活性，IC50为15 nM。然而, 一些整合酶突变型, 包括 V75I, Q148R, V151I, 和G163R 对HIV 整合酶抑制剂具有抗性。BMS-707035和靶点DNA与IN结合是互斥的，通过增加靶点 DNA量而克服BMS-707035对链转移催化的抑制反应。BMS-707035 与IN的结合亲和力也受预加工的 U5 长末端重复序列(LTR)处的四个末端碱基影响。IN的Gln¹⁴⁸ BMS-707035与 IN的结合的关键。^[1]另一方面，通过调节结合和分离的动力学，病毒LTR的3’末端阻碍 BMS-707035 与IN的结合率。^[2]
体内研究
临床实验	BMS-707035治疗HIV-1感染已经完成二期临床实验阶段。
特征	BMS-707035是有效的特定HIV整合酶(IN)可逆抑制剂。

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验: ^[1]

链转移活性和抑制实验	通过亲近闪烁检测法(SPA)测量和多种双重长末端重复序列络合的纯化整合酶活性。步，通过使个别寡核苷酸退火，而制备病毒双重长末端重复序列。通过5’-生物素连接器在正链上使病毒（供体）LTR DNA 连到链霉亲和素包被的SPA PVT 磁珠上。10 mg SPA PVT 磁珠悬浮在0.2 mL PBS上。悬浮液在低于5000×g转速下离心15分钟。移除悬浮液，小珠再次悬浮在 0.2 mL PBS, 0.85 M NaCl,和21 μL 12 μM 双链 HIV LTR DNA混合液中。双链序列为: 正链, 5’-生物素-ACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCA;负链, 5’-ACTGCTAGAGATTTTCCACACTGACTAAAAG。LTR DNA在室温下进行摇摆配对，进行60分钟，加入 0.8 mL TE，混合物在低于5000×g 转速下离心，然后悬浮在0.8 mL TE, 50 mM NaCl混合物上。用TE, 和50 mM NaCl冲洗磁珠冲洗4次，进行离心除去未结合的病毒LTR DNA。最后磁珠再次悬浮在0.2 mL PBS中，在4^oC下储存。 80链转移反应的酶复合体准备如下: 0.15 mL 磁珠-DNA复合体, 2.25 mL SPA buffer (13.3 mM 二硫苏糖醇, 32 mM MOPS, pH 7.0, 0.067% NP-40, 6.4% 聚乙二醇, 25.6 mM MgCl₂, 12.8% (v/v) Me₂SO, 和 100 mM NaCl), 和 IN (37 μg WT, 88 μg N155H, 和 36 μg Q148R)，在37^oC下温育。1.5 小时后, 复合物颗粒化，然后再次悬浮在 2.4 mL SPA buffer中。通过滴定实验测定IN适当用量，作为产生量链转移产物而所需酶的最低用量。制备靶点DNA (5’-[³³P]TGACCAAGGGCTAATTCACT-3’，退火为5’-[³³P]AGTGAATTAGCCCTTGGTCA-3’) 。然后使 ³³P-标记的寡核苷酸退火，形成靶点双链DNA。链转移实验由 30 μL IN 复合物和10 μL 25% Me₂SO/H₂O)(v/v) 在白色微孔板上进行。在37^oC下温育10分钟后,加入 10 μL ³³P-标记的靶点DNA (1×10⁶ cpm) (靶点终浓度为0.92 nM)。板在 37^oC下维持2小时，然后加入 200 μL PBS, 50 mM EDTA使链转移反应终止。使实验板立起来过夜，然后在Topcount 闪烁计数器上读数。通过SPA实验测定HIV-1 IN 复合体抑制敏感性，在 10 μL 25% (v/v) Me₂SO/H₂O中加入溶于25% (v/v) Me₂SO/H₂O的BMS-707035的5倍连续稀释液绘制S型剂量反应曲线，分析数据。

链转移活性和抑制实验

通过亲近闪烁检测法(SPA)测量和多种双重长末端重复序列络合的纯化整合酶活性。步，通过使个别寡核苷酸退火，而制备病毒双重长末端重复序列。通过5’-生物素连接器在正链上使病毒（供体）LTR DNA 连到链霉亲和素包被的SPA PVT 磁珠上。10 mg SPA PVT 磁珠悬浮在0.2 mL PBS上。悬浮液在低于5000×g转速下离心15分钟。移除悬浮液，小珠再次悬浮在 0.2 mL PBS, 0.85 M NaCl,和21 μL 12 μM 双链 HIV LTR DNA混合液中。双链序列为: 正链, 5’-生物素-ACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCA;负链, 5’-ACTGCTAGAGATTTTCCACACTGACTAAAAG。LTR DNA在室温下进行摇摆配对，进行60分钟，加入 0.8 mL TE，混合物在低于5000×g 转速下离心，然后悬浮在0.8 mL TE, 50 mM NaCl混合物上。用TE, 和50 mM NaCl冲洗磁珠冲洗4次，进行离心除去未结合的病毒LTR DNA。最后磁珠再次悬浮在0.2 mL PBS中，在4^oC下储存。 80链转移反应的酶复合体准备如下: 0.15 mL 磁珠-DNA复合体, 2.25 mL SPA buffer (13.3 mM 二硫苏糖醇, 32 mM MOPS, pH 7.0, 0.067% NP-40, 6.4% 聚乙二醇, 25.6 mM MgCl₂, 12.8% (v/v) Me₂SO, 和 100 mM NaCl), 和 IN (37 μg WT, 88 μg N155H, 和 36 μg Q148R)，在37^oC下温育。1.5 小时后, 复合物颗粒化，然后再次悬浮在 2.4 mL SPA buffer中。通过滴定实验测定IN适当用量，作为产生量链转移产物而所需酶的最低用量。制备靶点DNA (5’-[³³P]TGACCAAGGGCTAATTCACT-3’，退火为5’-[³³P]AGTGAATTAGCCCTTGGTCA-3’) 。然后使 ³³P-标记的寡核苷酸退火，形成靶点双链DNA。链转移实验由 30 μL IN 复合物和10 μL 25% Me₂SO/H₂O)(v/v) 在白色微孔板上进行。在37^oC下温育10分钟后,加入 10 μL ³³P-标记的靶点DNA (1×10⁶ cpm) (靶点终浓度为0.92 nM)。板在 37^oC下维持2小时，然后加入 200 μL PBS, 50 mM EDTA使链转移反应终止。使实验板立起来过夜，然后在Topcount 闪烁计数器上读数。通过SPA实验测定HIV-1 IN 复合体抑制敏感性，在 10 μL 25% (v/v) Me₂SO/H₂O中加入溶于25% (v/v) Me₂SO/H₂O的BMS-707035的5倍连续稀释液绘制S型剂量反应曲线，分析数据。

温馨提示：不可用于临床治疗。

BMS-707035;化学试剂