AMG-458

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其他更新日期：2022-09-24

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产品详情:

英文名称：: AMG-458

货号：: S2747

规格：: 5mg/10mg/10mM/1mL

Selleck Chemicals美国品牌，中国库存现货，c-Met抑制剂，CAS#913376-83-7 。
更多详情请访问中国唯一官方网站：
http://www.selleck.cn/products/amg458.html

生物活性

产品描述	AMG 458是一种有效的c-Met抑制剂，K_i为1.2 nM，作用于c-Met比作用于VEGFR2选择性高350倍左右。
靶点	人c-Met	鼠c-Met
IC50	1.2 nM (K_i)	2.0 nM (K_i) ^[1]
体外研究	AMG 458作用于PC3和CT26细胞也抑制HGF调节的c-Met磷酸化，IC50分别为60和120 nM。^[1]有NADPH存在条件下，AMG 458共价结合到鼠和人类肝脏微粒体蛋白上。AMG 458与蛋白巯基反应，产生甲氧基喹啉硫醚共轭。^[2]最新研究显示AMG 458抑制c-Met在H441位点磷酸化，AMG 458降低c-Met在A549位点组成型和HGF诱导型磷酸化。放射治疗和AMG 458治疗联用，通过降低p-Akt和p-Erk水平, 而提高H441细胞凋亡。 ^[3]
体内研究	AMG 458在鼠，狗，猴，人类的肝脏微粒体中代谢稳定。口服处理AMG 458，具有明显的生物有效性。口服处理AMG 458抑制HGF调节的c-Met磷酸化，ED90约为30 mg/kg。AMG 458作用于NIH3T3/TPR-Met和U-87 MG移植瘤，按100 mg/kg剂量每天处理一次，或者按30 mg/kg剂量每天处理2次，明显抑制肿瘤生长，且不会引起体重变化。^[1]
临床实验
特征	AMG 458作用于所有物种都100%有效，且越高级的哺乳动物半衰期越长。

推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)

激酶实验: ^[1]

体外激酶实验	使用酶,ATP,和底物(胃泌激素)用于同质时间分辨荧光测定。使用10点反应曲线测定AMG 458。酶与反应buffer(60 mM HEPES, pH 为7.4, 50 mM NaCl, 20 mM MgCl₂, 及5 mM MnCl₂)混合。在实验开始前加入终浓度为1 mM DTT, 0.2 mM Na₃VO₄,及 20 μg/mL BSA。加入5.75 mg/mL链霉亲和素-别藻蓝蛋白和0.1125 nM Eu-PT66，HTRF反应立刻进行。在室温下温育30分钟，在器上读取荧光比率。
c-Met的自磷酸化实验	使用标准培养基培养PC3和CT23细胞，作为单分子膜。使用定量化学发光免疫分析测定AMG 458作用于血清饥饿的PC-3 (人) 或CT26 (鼠)细胞中HGF调节的c-Met自磷酸化作用时的IC50值。PC3和CT26 细胞按每孔2×10⁴个细胞接种在96孔板上。接种24小时后，细胞在含0.1% BSA的培养基上饥饿处理18到20小时。然后用10点连续稀释的AMG458在37^oC下处理细胞，处理持续1小时。然后用浓度的重组人类HGF在37^oC下刺激处理10分钟。用PBS和溶解液(1% Triton X-100, 50 mM Tris pH 为8.0, 100 mM NaCl, 300 μM Na3OV4 和蛋白酶抑制剂)冲洗一次细胞。细胞裂解物和生物素标记的羊c-Met抗体(BAF358-人c-Met, BAF527-鼠c-Met) 温育，随后鼠磷酸酪氨酸抗体4G10和BV-tagTM 标记的鼠IgG作为测定抗体。用BioVeris M-系列仪器测定c-Met磷酸化水平。使用Xlfit4参数方程计算IC50 值。

体外激酶实验

使用酶,ATP,和底物(胃泌激素)用于同质时间分辨荧光测定。使用10点反应曲线测定AMG 458。酶与反应buffer(60 mM HEPES, pH 为7.4, 50 mM NaCl, 20 mM MgCl₂, 及5 mM MnCl₂)混合。在实验开始前加入终浓度为1 mM DTT, 0.2 mM Na₃VO₄,及 20 μg/mL BSA。加入5.75 mg/mL链霉亲和素-别藻蓝蛋白和0.1125 nM Eu-PT66，HTRF反应立刻进行。在室温下温育30分钟，在器上读取荧光比率。

c-Met的自磷酸化实验

使用标准培养基培养PC3和CT23细胞，作为单分子膜。使用定量化学发光免疫分析测定AMG 458作用于血清饥饿的PC-3 (人) 或CT26 (鼠)细胞中HGF调节的c-Met自磷酸化作用时的IC50值。PC3和CT26 细胞按每孔2×10⁴个细胞接种在96孔板上。接种24小时后，细胞在含0.1% BSA的培养基上饥饿处理18到20小时。然后用10点连续稀释的AMG458在37^oC下处理细胞，处理持续1小时。然后用浓度的重组人类HGF在37^oC下刺激处理10分钟。用PBS和溶解液(1% Triton X-100, 50 mM Tris pH 为8.0, 100 mM NaCl, 300 μM Na3OV4 和蛋白酶抑制剂)冲洗一次细胞。细胞裂解物和生物素标记的羊c-Met抗体(BAF358-人c-Met, BAF527-鼠c-Met) 温育，随后鼠磷酸酪氨酸抗体4G10和BV-tagTM 标记的鼠IgG作为测定抗体。用BioVeris M-系列仪器测定c-Met磷酸化水平。使用Xlfit4参数方程计算IC50 值。

动物实验: ^[1]

动物模型	携带NIH3T3/TPR-Met和U-87 MG移植瘤模型的6到8周大的雌性CD-1 nu/nu鼠
配制	静脉注射:1 mg/kg(20% Captisol，使用甲磺酸调pH到3.5)
剂量	10,30或100 mg/kg
给药处理	静脉注射或口服处理