Human IL-2 ELISA Kit

      碧云天的Human IL-2 ELISA Kit (Human Interleukin-2 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白细胞介素2酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-2的ELISA试剂盒。
      本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为5.8pg/ml，与人IL-2sRα、IL-2sR/Fc Chimera、IL-2 sRβ、IL-2 sRγ，小鼠IL-2，大鼠IL-2等没有交叉反应。板内、板间变异系数均小于10%。
      IL-2即白细胞介素-2(简称白介2)，也称为T cell growth factor (TCGF)，是一种分子量约为15-18kDa的糖基化α螺旋多肽，属于γ_c细胞因子家族，以单体形式存在，半衰期极短(<30min)。成熟的人IL-2是由153个氨基酸剪掉20个氨基酸的信号肽所剩余的133个氨基酸组成，成熟结构域自然状态下呈α螺旋结构，翻译后加工包括第三位Thr位点的O-糖基化和二硫键的形成。蛋白链中有三个半胱氨酸残基(Cys)，位于第58、105和125位。58位和105位半胱氨酸残基结合形成二硫键是蛋白具有活性的必备前提。成熟的人IL-2与犬、大鼠、猫和猴IL-2的氨基酸同源性分别达73%、66%、78%和97%。虽然人IL-2与小鼠IL-2的氨基酸同源性仅有60%，但是人IL-2可以激活小鼠细胞上的IL-2受体。γδ T细胞、活化的CD4⁺和CD8⁺ T细胞、神经细胞、小神经胶质细胞和造血干细胞等均能够分泌IL-2。
      IL-2受体(IL-2R)是异源三聚体，由55kDa的CD25/IL-2 Rα链、70kDa的IL-2 Rβ和65kDa的γ_c链组成。IL-2首先与IL-2 Rα结合形成二元复合物，然后募集IL-2 Rβ和γ_c形成四聚体的信号复合物。除了IL-2，IL-2 Rβ同时也是IL-15四聚体信号复合物的组成部分，而γ_c是IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21受体所共有的公共链。
      IL-2在抗体刺激引起的不同反应阶段的T细胞，自然杀伤细胞和B细胞的细胞增殖方面起重要的作用，此外，IL-2还可调节γ干扰素、主要组织相容性抗原的表达，刺激活化的B细胞的增殖和分化，提高自然杀伤细胞的活性和抑制粒细胞/巨噬细胞的增殖。IL-2还可诱导少胶突细胞的增殖和分化。
      IL-2与其受体结合后通过磷酸化作用激活JAK-STAT信号通路，将信号传递至细胞核实现对目标基因的调控作用。此外，在Shc蛋白的作用下，IL-2还可以通过形成Grb2/SOS复合物实现对下游Ras/Raf/MEK/MAPK和PI3K/Akt/P70S6K等多种信号通路的激活。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人IL-2的浓度，其原理见图1。人IL-2特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IL-2会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人IL-2抗体后，生物素化抗人IL-2抗体与人IL-2结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人IL-2浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中IL-2浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

      一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

保存条件：
      除标准品外，4℃保存6个月内有效。标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效。
注意事项：
      由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
      洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
      为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
      TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
      加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
      不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
      充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
      本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
      洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
      检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
      加样过程中须避免气泡的产生。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。