Rat IL-10 ELISA Kit

      碧云天的Rat IL-10 ELISA Kit (Rat Interleukin-10 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠白细胞介素10酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-10的ELISA试剂盒。
      本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为28pg/ml，与CDNF、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、PDGF-BB、TNF-α、人IL-10、小鼠IL-10等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
      IL-10即白细胞介素-10(简称白介10)，又称细胞因子合成抑制因子(CSIF)，属于IL-10α螺旋细胞因子家族中的一员，该家族还包括IL-19、IL-20、IL-22、IL-24和IL-26/AK155。IL-10通常由活化的造血细胞分泌，此外肝星状细胞、角质细胞和胚胎滋养叶细胞也能分泌IL-10。小鼠细胞能够响应人IL-10，而小鼠的IL-10并不能作用于人源细胞上。成熟的大鼠IL-10与小鼠IL-10具有85%的氨基酸同源性，与牛、犬、马、豚鼠、猫、人、绵羊和猪的IL-10具有71-79%的氨基酸同源性。成熟的IL-10分子量在36kDa，其包含两个链内二硫键，以非共价二聚体的形式存在。
      IL-10受体复合物由两部分组成：IL-10 Rα，分子量为110kDa的跨膜糖蛋白，主要表达在淋巴细胞，自然杀伤细胞、巨噬细胞、单核细胞、星形胶质细胞、肠内皮细胞、胚胎滋养叶细胞和活化的肝星状细胞；IL-10 Rβ同样为跨膜蛋白，分子量在75kDa，在多种细胞上都有表达。IL-10二聚体与两条IL-10 Rα链结合，随后招募两条IL-10 Rβ链。IL-10 Rβ并不能直接与IL-10结合，但它在信号传导过程中起重要作用。IL-10 Rβ同时还是IL-22、IL-26、IL-28和IL-29的受体组成部分。
      IL-10对免疫反应的调节有刺激和抑制两方面的作用。IL-10能抑制Th1细胞和Th2细胞的活化和扩增，能促进M2型巨噬细胞的产生。Treg细胞和调节性B细胞分泌的IL-10对Treg细胞的生长起重要作用，然而在肿瘤微环境中，IL-10则会抑制Treg细胞的扩增。IL-10可以促进CD8⁺ T细胞在肿瘤部位的蓄积和扩增，IL-10在Sjogren’s 综合征、原发性中枢神经系统淋巴瘤和卵巢癌中表达上升。
      IL-10与受体复合物结合后首先导致JAK1和YTK2的磷酸化，随后使得STAT1和STAT3发生磷酸化。磷酸化的STAT3形成二聚体进入细胞核对靶基因进行调控。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中大鼠IL-10的浓度，其原理见图1。小鼠IL-10特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的大鼠IL-10会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗大鼠IL-10抗体后，生物素化抗大鼠IL-10抗体与大鼠IL-10结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。大鼠IL-10浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

      一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

保存条件：
      除标准品外，4℃保存6个月内有效。标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效。
注意事项：
      由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
      洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
      为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
      TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
      加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
      不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
      充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
      本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
      洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
      检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
      加样过程中须避免气泡的产生。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。